便秘大鼠胃肠道胞凋亡及bcl-2，bax变化研究.pdf

中文摘要 便秘大鼠胃肠道细胞凋亡及bcI-2、 bax变化研究 摘 要 目的：采用原位末端标记法(TUNEL)和免疫组化的方法 检测便秘大鼠胃、回肠、横结肠粘膜和肌层细胞凋亡及凋亡 相关基因bcl．2、bax的表达，并与正常对照组进行对比，以 进一步了解细胞凋亡与便秘大鼠胃肠道病变之间的联系。 方法：1动物分组：选取健康Wistar大鼠40只，雌雄各 半，按照完全随机的方法进行分组，实验组20只，对照组 20只，分组后各组间体重、性别无显著性差异。 2模型建立：实验组采用大黄浸液灌胃，首日剂量为 800mg／kg(生粉)，此后每日剂量在前一日基础上增加 200mg／kg(生粉)，直至实验组出现半数大鼠粪便变稀，保持 剂量至80％的稀便消失，继续加量给药，至又有半数大鼠粪 便变稀，如此程序循环3次，待实验组第三次80％的稀便消 失一周后停止建模，对照组以同等体积蒸馏水灌胃。 3动物处理：切取试验组及对照组大鼠胃窦、回肠、横结肠 标本，进行HE染色，采用原位末端标记法(11『NEL)及免疫组 化PV法检测粘膜层和肌层的原位细胞凋亡及bcl-2、bax在粘 膜层和肌层的表达。 秩和检验进行统计分析，检验水准d=o．05。 5数据处理：5．1凋亡检测阳性细胞细胞核染成棕黄色，凋 亡指数(灿)的计算：每例标本随机选取5个高倍视野(400 中文摘要 倍)至少计算1000个细胞中凋亡细胞所占百分比。 5．2bcl．2、bax切片结果以细胞核和细胞质内出现黄到棕褐 颗粒为阳性细胞。在染色效果好、阳性细胞分布均匀的区域， 计数高倍镜视野下100个细胞中阳性细胞数，以百分数表示。 免疫阳性细胞数超过10％作为组织阳性诊断标准，再根据高 倍镜下阳性强度划分无色为阴性(一)．淡黄色为弱阳性(十)、 棕黄色为阳性(州和棕褐色为强阳性(十㈩。最后运用显微 图像分析系统(VIDAS)，分别测定胃、回肠、横结肠粘膜与 肌层免疫反应产物的平均光密度值。 结果：1TUNEL标记的阳性细胞(凋亡细胞)主要表现为 胞核棕黄色着色，胃肠道不同层次均有阳性细胞分布。实验 组胃粘膜凋亡细胞明显多于对照组(pO．05)；实验组胃肌层 凋亡细胞多于对照组(p0．05)；实验组回肠粘膜凋亡细胞多 于对照组凋亡细胞(p0．05)；实验组回肠肌层凋亡细胞与对 照组相比无显著差异(p0．05)；实验组横结肠粘膜凋亡细胞 多于对照组凋亡细胞(p0．05)；实验组横结肠肌层凋亡细胞 多于对照组(p0．05)。 2免疫组化bcl．2、bax染色：试验组、对照组大鼠胃、回肠 与横结肠粘膜层、肌层均可见细胞明显着色，显色大多位于 胞浆，也有在胞核内，为棕黄色，有的表现为小颗粒状呈弥 散性或者片状分布。试验组大鼠胃粘膜与肌层bcl．2、bax的 表达比较对照组大鼠均明显增强(po．05)，试验组大鼠回 试验组大鼠回肠肌层bcl．2与bax的表达比较对照组大鼠无显 比较对照组大鼠均明显增强(po．05)，试验组大鼠横结肠 中文摘要 组大鼠横结肠肌层bax的表达比较对照组大鼠无显著意义 (p0，05)。 3胃肠道大体病理变化及HE染色：两组大鼠胃肠道外观无明 显差别，粘膜无色素沉着。对照组大鼠胃肠道切片HE染色未 发现病变，实验组大鼠胃肠道切片HE染色可见粘膜慢性炎症 改变，胃肠道全层大量嗜酸性粒细胞浸润，以固有膜为主， 粘膜下肌层部分增厚，胶原纤维化，固有膜水肿，肌层胶原 纤维增生，肌间神经丛神经细胞空泡变性、减少。 结论：1便秘大鼠胃肠道粘膜层和肌层的凋亡细胞比较 对照组明显增多，表明便秘大鼠胃肠道病变包括粘膜和肌 口 店o 2便秘大鼠胃、回肠、横结肠粘膜层与肌层凋亡细胞明显增 多，提示便秘大鼠胃肠道病变不仅局限于结肠，胃与回肠同 样发生病变。 3便秘大鼠胃、横结肠肌层凋亡细胞明显多于对照组。说明 便秘大鼠肌层病变特别是神经元的退行性改变和凋亡有密 切关系。 4便秘大鼠胃肠道bcl．2的表达比较对照组大鼠胃肠道增强， 会增加患胃肠道肿瘤的危险。 关键词：泻剂结肠； 胃肠道； 凋亡； bcl一2；bax 英文摘要