内嵌雪旺细胞-物膜支架神经导管的实验研究.pdf

主要英中文缩略语对照 Ara-C Arabinoside 阿糖胞苷 Cytosine Brain．Derived Factor 脑源性神经营养因子 BDNF Neurotrophic CNTF Factor 睫状神经营养因子 Neurotrophic Ciliary DMEMDulbeco’SModifiedMedium杜氏改良依格培养液 Eagle’S ECMExtracellarMatrix 细胞外基质 EMGElectromyogram 肌电图 FB Fibroblast 成纤维细胞 GDNFGlialcell-Derived Factor胶质细胞源性神经营养因子 Neurotrophic NC NerveConduit 神经导管 NCV Conduction Nerve Velocity 神经传导速度 NGFNelVeGrowthFactor 神经生长因子 PBS BufferedSaline 磷酸盐缓冲液 Phosphate PGA Acid 聚羟基乙酸 PolyGlycolic PLA LacticAcid 聚乳酸 Poly PLGA Acid 聚乳酸／羟基乙酸共聚物 PolyLactic—CO-glycolic SC SchwannCell 雪旺氏细胞 中文摘要 目的：理想的组织工程化人工神经应该由具备特定三维支架结构的可降解神 经导管和在支架上有序排列的雪旺细胞(sc)构成。本实验探讨用一种新的可降 解生物材料制成雪旺细胞一神经导管复合物，观察其修复大鼠较长距离坐骨神经 缺损的效果。 材料和方法：实验分三部分。第一部分：大量获得新生鼠雪旺细胞的实验研 究。雪旺细胞是周围神经系统特有的胶质细胞，对促进周围神经损伤后修复起重 要作用。我们采用二次植块法、双酶消化法及二者的混合法分别培养sc，观察 sc生长情况并进行了三种方法的比较。第二部分：雪旺细胞与不同结构的聚乳 酸／羟基乙酸共聚物(PLGA)导管和PLGA生物膜生物相容性实验研究。将Sc分 别与神经导管和生物膜联合培养，观察sc与材料的相容性及生长情况，并用MTT 法检测材料上sc的相对增殖度。第三部分：内置复合雪旺细胞PLGA生物膜支架 神经导管的实验研究。采用PLGA制成的生物膜和sc共同培养，将富含sc的生 物膜嵌入导管内制成人工神经，用这种支架材料桥接sD大鼠20mm长坐骨神经缺 损，观察该人工神经修复周围神经缺损的效果。 结果：采用二次植块和双酶消化混合法培养sC，通过用细胞计数，S-100 染色及MTT法检测，经对比得知该方法较单纯的植块法或双酶消化法能够获得的 sc数量更多，纯度更高。经Ara—C再次纯化后纯度无明显提高，但细胞的增殖 能力却有所下降。PLGA生物膜和导管分别与SC共同培养后，发现SC与两种结 构的PLGA均具有良好的相容性，且黏附在材料上的SC经酶消化提取后用MTT 检测发现仍然具有较高的增殖活性。用富含SC的生物膜置入导管后可以使神经 导管内携带更多的sc，而PLGA生物膜的编织结构具有固定的