第二章PCR技术解析.pptVIP

第一节 PCR技术基础 一、PCR常见问题 无扩增产物 无扩增产物 巢式PCR（Nest-PCR） 1.巢式PCR（Nest-PCR） 2. 递减PCR（TouchDown PCR） 3. 热启动PCR （HotStart PCR） 4. 使用PCR增强剂 5’ 5’ Bam H I Bam H I Bam H I Bam H I GTCC GGAC CCTG CAGG GTCC GGAC CCTG CAGG CCTG GGAC GTCC CAGG 质粒DNA 目的基因 限制性核酸内切酶 2.基因检测 A’ 内源性病变基因 正常人 A 病 人 病原微生物基因 正常人 (-) 病 人 (+) 遗传病的诊断 基因缺失、插入或置换等 地中海贫血 珠蛋白链合成不平衡 A 正常人 病 人 正常 病人 PCR-RFLP法： 限制性内切酶 恶性肿瘤（癌基因或抑癌基因） Ras基因 突变 限制性内切酶 正常 突变 电泳 HLA系统基因分型 PCR-RFLP法 PCR-SSO法 PCR-SSCP PCR-SSP 3.基因配型 4.基因鉴定 女性 男性 Y引物 PCR 男性 女性 法医学分析 个体识别、亲缘鉴定 方法：PCR-RFLP DNA遗传指纹 PCR-ASO PCR-VNT