02第二章 仪器鉴别法2.pptVIP

(5) 液相色谱检测器 a.紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。 色谱法 b.荧光检测器 高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； 色谱法 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 色谱法 流动相选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 色谱法 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) 水、甲醇、氯仿、正丁醇极性大小？ 选择流动相时应注意的几个问题 （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。溶剂需脱气，过滤。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 色谱法 气相色谱法 气相色谱法是采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 注入进样口的供试品被加热气化，并被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，色谱信号用记录仪、积分仪或数据处理系统纪录。 色谱法 工作流程示图 1.载气瓶 2.压力调节器 3.净化器 4.稳压阀 5.柱前压力表 6.转子流量计 7.进样器 8.色谱柱 9.色谱柱恒温箱 10.馏分收集口(柱后分离阀) 11.检测器 12.检测器恒温箱 13.记录器 14.尾气出口 色谱法 1.仪器分析应用数量增加，尤其是红外光谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。 2.制剂广泛采用IR法鉴别。与原料药相比，制剂需先分离再压片绘制图谱。 二、药物鉴别方法新动向 鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。影响鉴别反应的主要因素有被测物浓度，试剂的用量，溶液的温度、 pH ，反应时间和干扰物质的存在等。 三、鉴别试验条件 （一）反应灵敏度和空白试验 在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度（sensitivity）。它以两个相互有关的量来表示： 四、鉴别试验灵敏度 最低检出量（又称检出限量） （以m表示），就是应用某一反应，在一定的条件下，能够观测出试验结果的供试品的最小量，其单位通常用微克（μg）表示。 最低检出浓度（又称界限浓度），是应用某一反应，在一定条件下，能够观测出供试品的最低浓度，通常以1: V(或1:G）表示，其中V(或G)表示含有1g重某供试品的溶液的毫升（或克）数。 影响条件： 1.在选用灵敏度很高的反应时，必须采用高纯度的试剂，非常洁净的器皿，才能保证鉴别试验结果的可靠性。 2.为了消除试剂和器皿可能带来的影响，应同时进行空白试验（blank test)以供对照。 空白试验，是在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。 3.与分析方法、观察方式、反应条件、人的观察能力等因素有关。 （二）提高反应灵敏度的方法 1.特定溶剂富集有色生成物，易于观测。 2.改进观测方法 客观化，科学化。 3.降低仪器噪音 主讲人：沈晓君 第三节 仪器分析法 紫外光谱法 红外光谱法 薄层色谱法 高效液相色谱法 气相色谱法法 光 谱 鉴 别 法 色谱鉴别法 仪 器 法 鉴 别 一  有机药物分子中含有共轭结构，生、助色基团而显示特征吸收光谱，可作为鉴别的依据。 光谱简单，专属性差。 光谱法  1.紫外光谱鉴别法 紫外 ?/m 10 1