第七章原核基因表达调控分析.ppt

大肠杆菌对乳糖的反应 以甘油为碳源的培养基，按照lac操纵子本地水平表达，每个细胞可有几个分子的β-半乳糖苷酶和乳糖透过酶 加入乳糖----异构乳糖----与操纵区上的阻遏物相结合使后者失活---离开操纵区---开始lac mRNA的生物合成-----编码大量的β-半乳糖苷酶和乳糖透过酶。 结果：乳糖大量涌入细胞，被降解为葡萄糖和半乳糖 3、阻遏物lacI基因产物及功能 乳糖操纵子阻遏物mRNA是由弱启动子控制下组成型合成的，每个细胞中有5-10个阻遏物分子。 当I基因由弱启动子突变成强启动子，细胞内不可能产生足够的诱导物克服阻遏状态，整个lac操纵子在这些突变体中就不可诱导。 * 大肠杆菌中的各种σ因子比较 σ因子 编码基因 主要功能 σ70 rpoD 参与对数生长期和大多数碳代谢过程基因的调控 σ54 rpoN 参与多数氮源利用基因的调控 σ38 rpoH 分裂间期特异基因的表达调控 σ32 rpoS 热休克基因的表达调控 σ28 rpoF 鞭毛趋化相关基因的表达调控 σ24 rpoE 过度热休克基因的表达调控 * （二）原核生物基因表达调控的特点 原核生物通过特殊代谢物调节基因活性主要分为： 可诱导调节 关闭-----工作------基因活化 可阻遏调节 开启-----关闭-------阻遏基因表达 * （二）原核生物基因表达调控的特点 调节的主要环节在转录水平上进行 σ因子决定RNA聚合酶识别特异性 主要通过操纵子模式进行调节 阻遏蛋白对转录的抑制作用（阻遏机制）是普遍存在的负调控作用 * 原 核细胞 在 转 录 水 平 上 调 控 * 1、原核生物基因调控机制的类型 a、弱化子对基因活性的调节 b、代谢产物对基因活性的调节 c、降解物对基因活性的调节 d、细菌的应急反应 * 弱化子 当操纵子被阻遏，RNA的合成被终止时，起终止转录作用的那一段核苷酸，称为弱化子。? 因为核糖体在 基因转录产物上的不同位置，决定了RNA可以形成哪一种形式的二级结构，并由此决定基因能否继续转录 1、弱化子对基因活性的影响 * 2、 降解物对基因活性的调节 1、葡萄糖效应 是指当葡萄糖和其它糖类一起作为细菌的碳源时葡萄糖总是优先被利用，葡萄糖的存在阻止了其它糖类的利用的现象。 * 2、降解物对基因活性的调节 葡萄糖通过降低cAMP的含量而抑制基因表达 * 3、细菌的应急反应 当细菌发现它们处于很差的生长环境，没有足够的氨基酸来维持蛋白质合成时，它们就会停止大部分活动。 * 产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称之为超级调控子或称为魔斑。 超级调控因子或称为魔斑 * 细菌的应急反应的机制 产生应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp） 诱导物：空载tRNA * 1961年由莫诺（Monod,J.法)和雅各布(Jacob,F.法)提出，用来阐述大肠杆菌乳糖代谢中基因表达的调控机制。 获1965年诺贝尔生理学和医学奖 7.2、乳糖操纵子与负控诱导系统 * F·雅各布（Francois Jacob 1920～）法国生物化学家、分子生物学家 J·L·莫诺（Jacques L. Monod 1910～1976）法国生物学家 操纵子(operon) 机制 * ------ 操纵子(operon) 操纵子：是基因表达的协调单位，由启动子、操纵基因及其所控制的一组功能上相关的结构基因所组成。 操纵基因受调节基因产物的控制。 操纵基因是顺式控制元件，阻抑蛋白是反式作用因子。 *  ------ 操纵子(operon) 大肠杆菌乳糖操纵子包括3个结构基因： lacZ 决定lacZ编码β-半乳糖苷酶 lacY 决定lacY编码β-半乳糖苷透过酶 lacA 决定lacA编码β-半乳糖苷乙酰基转移酶 以及启动子、控制子、阻遏子等 * 乳糖操纵子(lac operon)的结构与组成 调控区 阻遏基因 启动子 控制基因 结构基因 Z： β-半乳糖苷酶 Y： 透过酶 A：乙酰基转移酶 Z Y A O P DNA I * ------ 操纵子(operon) 1、β-半乳糖苷酶能将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖，也能水解其他β-半乳糖苷 2、 β-半乳糖苷透过酶能使外界的β-半乳糖苷（如乳糖）透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内 3、 β-半乳糖苷乙酰基转移酶把乙酰辅酶A上的乙酰基转移到β-半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖 * 大肠杆菌可以利用葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖等作为碳源而生长繁殖，当培