鹅FSH基因的克隆及表达初步分析讲解.pptVIP

1.4 转染COS-7细胞 1.4.1 放射免疫检测转染重组FSH质粒后FSH蛋白的表达量 1.4.2 荧光定量检测转染重组质粒后，FSH信号通路中某些相关基因的表达量变化 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 2 结果与分析 2.1 CTP扩增结果 图4.3 CTP基因扩增结果 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 2.2 鹅异二聚体pVITRO2-FSHαβ-CTP的真核表达载体的构建 2.2.1 鹅FSHαβ-CTP的扩增结果 鹅FSHβ-CTP的PCR扩增结果 图2.2 FSHβ-CTP扩增结果 注：A：CTP扩增结果；B：FSHβ扩增结果；C：FSHβ-CTP扩增结果 鹅不同生殖时期FSHβ基因mRNA表达量化 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 鹅FSHα基因PCR扩增结果 图2.3 FSHα扩增结果 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 图2.4 鹅异二聚体pVITRO2-FSHαβ-CTP双酶切结果 注： A：pVITRO2-FSHβ-CTP双酶切结果；B：异二聚体pVITRO2-FSHαβ-CTP质粒中FSHα基因的双酶切结果 A B 2.2.2 鹅异二聚体pVITRO2-FSHαβ-CTP的酶切 2.3 鹅单体pVITRO2-FSHβ-CTP-α真核表达载体的构建 2.3.1 鹅FSHβ-CTP-α的PCR扩增结果 图2.5 FSHβ-CTP-α PCR扩增结果 注：D：FSHβ-CTP扩增结果；E：FSHα基因扩增结果；F：FSHβ-CTP-α 基因扩增结果 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 2.3.2 鹅单体pVITRO2-FSHβ-CTP-α的酶切 图2.6 单体pVITRO2-FSHβ-CTP-α双酶切结果 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 2.6 转染细胞及表达结果 2.6.1 放免检测 图2.6 放免检测FSH蛋白表达量结果 图2.6 放免检测FSH蛋白表达量结果 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 2.6.2 转染融合基因重组质粒后，FSH信号通路中某些相关基因表达变化 图2.7 FSHβ基因表达量变化 图2.8 GnRH基因表达量变化 图2.9 GH基因表达量变化 图2.10 BMP基因表达量变化 鹅融合基因FSH在cos-7细胞中的表达 全文结论 1.利用基因克隆获得了FSHα、FSHβ基因，并首次通过RACE技术扩增获得了FSHβ cDNA全长序列，生物信息学分析了FSH基因的结构及功能，这对更深入的研究FSHβ基因的分子结构及功能提供参考。 2.利用qRT-PCR技术，研究了鹅FSHβ基因在开产前期、产蛋期（排卵前期、排卵后期）、就巢期四个生殖周期中，垂体、下丘脑、卵巢、输卵管生 殖组织mRNA相对表达量的变化，发现FSHβ mRNA的变化趋势与鹅生殖周期的变化密切相关，这为研究该基因对鹅的繁殖力调控机制提供参考，也为以后的育种工作奠定一定的理论基础。 3.利用融合基因技术，构建鹅FSH重组质粒转染细胞，发现CTP序列的添加可以提高FSH蛋白的分泌，且异二聚体和单体在不同的时间点分泌FSH 蛋白的量不同，以及通过qRT-PCR检测了FSH信号通路上基因的表达量变化，为深入研究FSH基因的作用机制提供一定的参考依据。 4.鹅FSH融合基因的研究为制备重组FSH制剂及长效激素的生产与应用奠定一定的理论基础。 江西农业大学遗传育种体系 兰旅涛教授、吴红翔老师等 扬州大学遗传育种体系 陈国宏教授、徐琪老师、常国斌老师等 支持与帮助本试验的所有老师和同学 陈阳、黄正洋、甄霆、马腾、戴爱琴、俞钦明等 致 谢 * 结果显示，与其他组织相比，FSHβ基因在鹅垂体、下丘脑、卵巢、输卵管等生殖相关组织中的表达量较高。 * 不同生殖时期浙东白鹅结果：在开产前期、产蛋期、就巢期3个不同生殖时期垂体和输卵管FSHβ mRNA的表达量总体上要高于下丘脑和卵巢，其中垂体、卵巢和输卵管中FSHβ mRNA表达量的变化趋势相同，均表现为先上升后下降，下丘脑中FSHβmRNA表达量表现为小幅度上升，且只有产蛋期输卵管中FSHβmRNA的表达量与开产前期相比存在差异显著性（P0.05），而垂体、下丘脑和卵巢FSHβmRNA的表达量在3个生殖周期内表达变化差异不显著（P0.05）。 * 在产蛋期内，扬州鹅垂体FSHβ mRNA要显著高于浙东白鹅（P0.01），而其他3个组织，两个鹅种间FSHβ mRNA差异均不显著（P0.05）。 * 鹅FSH 基因的克隆及表达初步分析 研究生：李欣