分子标记在水产生物育种中的应用精要.ppt

AFLP接头及引物序列 2个基因池的AFLP分析 不同引物对差异片段再扩增的电泳图 分子标记在虾蟹类育种中的应用 分子标记在水产生物育种中的应用 DNA分子标记技术在水产动物遗传育种中的应用主要体现在遗传多样性分析、种质鉴定、亲缘关系研究、亲子鉴定、遗传图谱构建、QTL定位和分子标记辅助育种等方面 应用于遗传育种领域的DNA分子标记技术主要有：随机扩增多态性DNA（Random amplified polymorphic DNA，RAPD）、限制性片段长度多态性技术（Restriction fragment length polymorphism RFLP）、扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism，AFLP）、简单序列重复（Simple Sequence Repeat，SSR）、单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism，SNPs）、表达序列标签（expressed Sequence tags，ESTs）、单链构象多态性（single strand conformation polymorphism，SSCP）、特异序列扩增（sequence characterized amplified regions，SCAR）、线粒体DNA（Mitochondrial DNA，mtDNA）分子标记、可变串联重复序列（Variable Number of Tandem Repeats，VNTR）、核糖体DNA内转录间隔区（internal transcribed spacers，ITS）分子标记等 常用于水产动物遗传多样性分析的分子标记有RAPD、AFLP和SSR等 如今的一些研究成果 岳志芹等利用AFLP分子标记结合“拟测交”策略，以中国对虾的单对杂交亲本及其F1代为作图群体，应用MAPMAKEREXP/3.0软件，分别构建了中国对虾雌、雄的遗传连锁图谱。连锁图中包含了5个连锁群。 孙昭宁等利用微卫星标记确定中国对虾后代的亲缘关系，以4个谱系清晰的家系为基础，检测两对微卫星标记在中国对虾家系鉴别中的应用，结果表明，利用两对微卫星引物产生的DNA指纹图谱，能够有效地区分中国对虾4个家系。 Dean等利用8个微卫星位点作为亲子鉴定分子标记，对同池养殖的22个日本对虾家系后代10%的最优个体进行亲子鉴定，从中筛选出生长较快及较慢的家系，并检测了在商业养殖环境中性状表达的基因环境互作效应 AFLP技术原理：AFLP技术是基于PCR反应的一种选择性扩增限制性片段的方法。由于不同物种的基因组DNA大小不同，基因组DNA经限制性内切酶酶切后，产生分子量大小不同的限制性片段。使用特定的双链接头与酶切DNA片段连接作为扩增反应的模板，用含有选择性碱基的引物对模板DNA进行扩增，选择性碱基的种类、数目和顺序决定了扩增片段的特殊性，只有那些限制性位点侧翼的核苷酸与引物的选择性碱基相匹配的限制性片段才可被扩增。扩增产物经放射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后根据凝胶上DNA指纹的有无来检验多态性 利用AFLP技术筛选锯缘青蟹性别差异DNA片段 技术路线图：DNA的提取 酶切反应（EcoR I /Mse I） 连接反应 预扩增反应 选择性扩增反应 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 银染 差异性片段回收与扩增 银染结果 利用AFLP技术，采用52个引物对，共扩增出 4312条带，平均每个引物对获得约83条带，共回收 候选差异DNA片段748条带。 差异性片段再扩增结果 将1~52对引物的组合分别编号为1~52。每个号码后的数字表示的是回收片段从大到小的排列，因此每对引物对的扩增结果也是从大到小排列.如图。  进一步的工作是将这些候选差异片段全部进行再扩增，把能扩增出来的PCR产物点在尼龙膜上或玻片上，做雌、雄southern杂交，在确认该片段是雌、雄之间的真正差异DNA片段后，再进行测序，这样才可真正筛选出与性别相关的分子标记。同时也为养殖、育种提供辅助手段，有助于缩短选种的周期，也有利于得到更优良的品种。 The end,thank you! 提取的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳检测,OD260测定和U