基因工程的应用及前景概述.ppt

* 提问：为什么植物的叶片能够发育成一棵完整的植物？基于植物细胞的全能性。 * 是利用管尖极细（0.1至0.5μm）的玻璃微量注射针，将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中，然后藉由宿主基因组序列可能发生的重组（rearrangement）、缺失（deletion）、复制（duplication）或易位（translocation）等现象而使外源基因嵌入宿主的染色体内。 目前最常用来生产转基因动物的方式为：直接把重组过的 DNA 注入授精卵的原核(pronuleus) 中，将从胚胎提供者的输卵管中取得的授精卵移到倒置显微镜上的微量注射台上，然后利用固定吸量管 (holdingpipette) 固定住，之后注射针则依序穿过 zona pellucida，ocyte membrane 及malepronuleus membrane后，将 DNA注入，注入时可以见到原核膨大。 优点： DNA损失少，无需选择标记基因整合效率高 以显微注射法转外源基因没有长度上的限制，目前已证明数百kb之DNA片段均可以成功产制出转基因动物。其缺点是设备精密而昂贵、操作技术需要长时间的练习，以及每次只能注射有限的细胞。 * * * 经过多年的实践，生物学家们发现一种细菌，其质粒可以转入到植物细胞中，并整合在植物DNA上——农杆菌。生活在植物根的表面依靠由根组织渗透出来的营养物质生存的一类细菌 ,能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物或裸子植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌的细胞中有一段T—DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T—DNA插入到植物基因中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T—DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移和整合。然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株，农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近几年来，农杆菌的介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用。  SCID严重联合免疫缺陷症 患者细胞的腺苷酸脱氨酶（ADA）基因突变； 治疗过程： →与运载体（逆转录病 毒）结合→构建重组载体 →分离患者有免疫缺陷的T淋巴细胞 →重组载体感染T淋巴细胞，使正常ada基因导入到T淋巴细胞的基因组中 →检测是否转入 →把重组T淋巴细胞注射入患者的骨髓中 先获取正常人的ADA基因 1、目的基因的安全性问题 2、运载体问题 3、治病多基因问题 基因治疗存在的问题 五、基因芯片 1、概念：把很多DNA片段装定在一块小玻璃上所形成的装片。 2、制作： 3、基因芯片的基本原理 分子杂交技术 4、基因芯片的用途 （1）检测基因表达的变化 （2）分析基因序列 （3）寻找新的基因 切下的叶片 重组的Ti质粒 重组的Ti质粒 大量扩增 目的基因导入动物细胞 从转基因羊中提取治疗心脏病的tPA药物 选择治疗基因 治疗基因与载体结合 治疗基因正常表达 基因治疗过程 基因治疗对癌症的治疗方案 抑制癌细胞增生基因 导入癌细胞 抑制癌细胞转录 DNA片断导入癌细胞 提高机体免疫力基因导入免疫系统 阻断癌细胞繁殖 提高免疫力 四 基因工程与环境保护 转基因植物：聚羟基烷酯，可降解生物塑料的原料 转基因细菌：提高分解石油的能力 转基因微生物：吸收重金属、降解有毒化合物、处理工业废水 基因工程的发展前景 光合作用：改造二磷酸核酮糖羧化酶 生物固氮：具有固氮能力的非豆科作物 生物反应器：转基因植物和动物生产药物 蛋白质工程：通过基因修饰或基因合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造出新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 蛋白质工程的目标：根据对蛋白质的特定需求，对蛋白质的结构进行分子设计。由于基因决定蛋白质，所以最终必须通过改造基因结构来改造蛋白质的结构。 蛋白质工程与基因工程的区别： 前者是通过对基因结构的改造而改造或创造蛋白质； 后者主要是把外源的基因插入到受体生物细胞中，并没有改造蛋白质的结构。 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 （2）方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 (三)将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 基 因 枪 法 打一枪即可10000个整合细胞/枪 火药、气