1型多聚ADP-核糖聚合酶在大鼠心肌缺血再灌注损伤中活性变化的实验的研究.pdf

·中文论著摘要· 1型多聚ADP．核糖聚合酶在大鼠心肌缺血再灌注损伤 中活性变化的实验研究 刖 舌 目前减轻急性心肌梗死缺血性损伤的有效手段是尽早实施再灌注治疗，而再 灌注同时会增加心肌损伤，包括微血管损伤、心律失常以及心肌细胞坏死的扩展。 完全清晰地阐明，心肌血流的中断和再恢复将触发许多病理生理过程，其中作为 的同工酶PARP．1的过度活化可能成为研究的关键，它或许是动物模型再灌注过 程中介导氧化诱导的细胞功能障碍和死亡的一个关键途径。 已知PARP．1涉及坏死性细胞死亡，这种死亡与细胞凋亡和自噬相比较，代 表了一种更严重的细胞终结形式。广泛的DNA损伤(活性氧如过氧亚硝酸盐， 羟基和超氧自由基)导致PARP过度活化从而消耗细胞内的烟酰胺腺嘌呤二核苷 酸(nicotinamideadenine 磷酸化抑制三磷酸腺苷(adenosine 死亡。PARP过度活化所致的细胞坏死性死亡与缺血再灌注损伤中由PARP．1抑 制或缺失所提供的显著的细胞保护作用相一致，而缺血再灌注损伤主要以坏死性 细胞死亡为特征。因此，坏死是一种普遍的死亡方式并且也能被调控，研究证实 PARP—l在与坏死和炎症相关的缺血再灌注损伤中起到至关重要的作用，因此， PARP抑制剂可使此类疾病明显获益，目前少数PAR／抑制剂已进入临床试验阶 段。最新研究显示，自由基．介导的PARP活化作用并不仅限于心肌，循环白细 胞同心肌细胞一样在再灌注后同样存在着PARP过度活化。 在此背景下，本研究旨在探讨循环白细胞内PARP激活能否作为再灌注心肌 中PARP活化的一个监测指标。为此，我们应用大鼠首先测定PARP活化的终产 伤进程中循环白细胞和再灌注心肌中PARP活化情况。其次，我们进一步明确循 环白细胞内PARP活化程度与心肌梗死范围的关系。最后，我们探讨PARP抑制 缺血的在体模型中提供心肌保护的治疗时间窗。 目 的 建立大鼠心脏I／R模型，检测再灌注早期不同时点心肌和外周血白细胞内 PARP．1活化产物PAR的表达；同时测定心肌梗死范围，探讨外周血白细胞 PARP．1活化与心肌PARP．1活化间的关系，及其与心肌损伤间的关系。最后， 探讨PARP抑制剂3．AB对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其有效给药时 间。 方 法 1、大鼠心脏I／R损伤模型的建立和分组 采用开胸结扎和松开冠状动脉的方法建立大鼠心脏I／R损伤模型。大鼠用 10％水合氯醛腹腔注射麻醉，气管切开插管行小动物呼吸机辅助呼吸，呼吸频率 75次／min。在第四肋间行左胸廓切开术，暴露心脏，打开心包，挤出大部分心脏。 暴露肺动脉圆锥与左心耳根部间的左冠状静脉。以左冠状静脉为标志，用5-0缝 线在左冠状静脉下穿线，连同左冠状静脉～起在距冠状动脉前降支根部1-2ram 形成一个直径约5mm的活结，将5mm聚乙烯软管置于活结中。45min后拔出聚 乙烯软管，使冠状动脉血流再通，在整个缺血和再灌注过程中，一直监测大鼠肛 温，通过热挚和台灯维持大鼠体温在37．380C。 (1)缺血再灌注不同时点PAR在心肌以及外周血白细胞内表达，随机分 为： sham组；I／R 另设一组，通过轻微改变冠脉结扎位置来获得一个较广泛的心肌梗死范围 进一步明确缺血再灌注不同时点外周血白细胞PARP．1活化与心肌损伤间的关 系，随机分为：I／R2h组；I／R6h组；I／R24h组 以及PARP活化的影响，随机分组为假手术+生理盐水组、假手术+3．AB组、I／R2h 2 钟iV．给药)。 为明确PARP抑制剂3-AB对大鼠心肌缺血再灌注24小时的心肌保护作用 药)。 2、外周血白细胞的准备 抽取肝素化抗凝全血6ml，应用单个核细胞分离液，采用密度梯度离心方法 分离单个核细胞。将6ml 至其顶部，室温下以8009离心15分钟，后用吸管抽吸血浆层至0．Sem厚包含单 个核细胞的不透明层，收集分离的单个核细胞使用梯度降温法于．700C冰箱中保 存备用。 3、心肌缺血危险区、梗死范围检测 chloride，TTC)染色