产气荚膜梭菌NetB毒素阻断ELISA方法的建立和应用.pdfVIP

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2016-03-23 发布于安徽
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产气荚膜梭菌NetB毒素阻断ELISA方法的建立和应用.pdf

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目录㈣Y2771㈣780 目录摘要………………………………………………………………………………………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………………一ⅡI 1前言……………………………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1不同类型产气荚膜梭菌研究进展…………………………………………………………………1 1．1．1 A型产气荚膜梭菌………………………………………………………………………………1 1．1．2 B、C、D型产气荚膜梭菌……………………………………………………………………．．2 1．1．3 E型产气荚膜梭菌………………………………………………………………………………2 1．2鸡坏死性肠炎概述…………………………………………………j……………………………．．2 1．2．1Q毒素与坏死性肠炎……………………………………………………………………………3 1．2．2 NetB毒素与坏死性肠炎………………………………………………………………………一3 1．2．3鸡坏死性肠炎流行病学………………………………………………………………………．．3 1．2．4鸡坏死性肠炎发病诱因………………………………………………………………………．．4 1．2．5鸡坏死性肠炎临床症状和病理变化…………………………………………………………．．4 1．2．6鸡坏死性肠炎的防治…………………………………………………………………………一5 1．3产气荚膜梭菌的诊断技术…………………………………………………………………………5 1．3．1病原学诊断方法………………………………………………………………………………～5 1．3．2分子生物学诊断方法…………………………………………………………………………．．5 1．3．3血清学诊断方法………………………………………………………………………………。6 1．4研究目的和意义……………………………………………………………………………………7 2材料与方法……………………………………………………………………………………………8 2．1试验材料……………………………………………………………………………………………8 2．1．1试验动物和细胞…………………………………………………………………………………8 2．1．2菌株、质粒及血清……………………………………………………………………………．．8 2．1．3主要分子生物学试剂…………………………………………………………………………。8 2．1．4主要试剂的配制………………………………………………………………………………一8 2．1．5仪器设备………………………………………………………………………………………11 2．2试验方法…………………………………………………………………………………………．11 2．2．1抗原制备………………………………………………………………………………………11 2．2．2多克隆抗体制备和生物活性鉴定……………………………………………………………14 2．2．3单克隆抗体腹水制各和生物学活性鉴定……………………………………………………15 2．2．4阻断ELISA方法的建立………………………………………………………………………16 2．2．5阻断ELISA方法的特异性试验………………………………………………………………18 2．2．6阻断ELISA方法的灵敏度试验………………………………………………………………19 2．2．7阻断ELISA方法的重复性试验………………………………………………………………19 2．2．8重组NetB蛋白免疫鸡血清抗体效价动态变化检测………………………………………。19 2．2．9阻断ELISA方法对临床样品的检测…………………………………………………………19 2．2．10数据统计………………………………………………………………………………………20 3结果…………………………………………………………………………………………………．．21 3．1重组NetB蛋白的诱导表