17β-雌二醇体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究.pdf

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17β-雌二醇体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究

目 录 中文摘要……………………………………………………………………..1 英文摘要…………………………………………………………………….。4 研究论文 17p.雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验 研究 。 前言………………………………………………………………………7日Ⅱ舌………………………………………………………………………’7 材料与方法……………………………………………………………..7 结果……………………………………………………………………11 附图……………………………………………………………………14 附表……………………………………………………………………18 讨论……………………………………………………………………20 结论……………………………………………………………………26 参考文献………………………………………………………………26 综述雌激素类物质对细胞生物学特性影响的研究进展………………29 致谢…………………………………………………………………………41 个人简历……………………………………………………………………42 中文摘要 17p.雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的 实验研究 摘 要 目的:本实验通过观察不同浓度的1713.雌二醇对体外培养人牙髓细胞 增殖、矿化、细胞周期以及碱性磷酸酶活性的影响,以探讨1713一雌二醇对 人牙髓细胞生物学特性的影响及作用机制,为将1713.雌二醇作为一种新型 的诱导剂应用于人牙髓组织的修复再生提供实验依据。 方法:选取因正畸或阻生新鲜拔除的健康、完整、无龋、无隐裂年轻 恒牙,在无菌条件下取出牙髓组织,采用组织块酶消化法获取人牙髓细胞 并进行原代培养。当细胞生长至铺满孔底80%时进行传代,从而获得大量 可供实验用的种子细胞。取第4代对数生长期人牙髓细胞爬片,用SABC 法进行波形蛋白和角蛋白免疫组化染色鉴定细胞来源,倒置显微镜下观 察。将处于对数生长期的第4代人牙髓细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后,制 养孔不加液,其余各孔每孔液量1509l,培养24h。观察细胞贴壁情况良好 后,弃上清液,PBS缓冲液清洗3次,吸干,将细胞随机分为5个实验组、 1个对照组和1个空白对照组,每组选6个孔。实验组:在相应的有细胞孔 组:在相应的有细胞孔内加入150m含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红高 糖DMEM培养液培养。空白对照组:在相应的无细胞孔内加入150山含2% 活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液培养。连续培养,每天 换液以维持药物浓度恒定。 M丌比色法检测1713.雌二醇对人牙髓细胞增殖的影响:分别于培养 MTT 48h和72h时随机取出一个96孔培养板,向所测孔内JJl/X.5mg/ml20山, 5min,以空白对照孔调零,在酶标仪上测定492nm下各孔的吸光度值。 流式细胞术检测1713一雌二醇对人牙髓细胞的细胞周期的影响:选用 中文摘要 加药物组)进行细胞周期试验。按照细胞周期试剂盒说明书操作,进行流 式细胞仪分析。 检i贝lJ 1713.雌二醇对人牙髓细胞的碱性磷酸酶活性的影响:分别在药物 作用7天和14天时随机取出一个96孔培养板,弃上清液,PBS缓冲液清洗3 无完整结构,经震荡后,按碱性磷酸酶试剂盒说明书加入碱性磷酸酶底物, mol/LNaOH 每孔100pl,培养箱内置30min,最后每孔加入0.250山终止反 应,以空白对照孔调零,在酶标仪上测定410nm下各孔的吸光度值。 茜素红染色法检i贝lJ 1713.雌二醇对人牙髓细胞矿化结节形成的影响:取 六孔板中培养,分为未诱导组和实验组,每组5个复孔。根据1713.雌二醇 对

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