紫杉醇对破骨细形成、分化及凋亡的影响.pdfVIP

LIIIIIIII IIIIIlIIIIIIIIMIIIMIIIIIIII Y2336709 目 录 中文摘要………………………………………………………………01 英文摘要………………………………………………………………………04 研究论文紫杉醇对破骨细胞形成、分化及凋亡的影响 前言 08 刚舌………………………………………………………………………………………………………。．U芍 材料与方法………………………………………………………p8 结果…………………………………………………………………16 附图………………………………………………………………………………17 1 附表………………………………………………………………．。2 讨论………………………………………………………………．22 结论………………………………………………………………………………2鲁 参考文献…………………………………………………………．24 综述紫杉醇及破骨细胞的相关性研究……………………………26 致谢……………………………………………………………………39 个人简历………………………………………………………………40 中文摘要 紫杉醇对破骨细胞形成、分化及凋亡的影响 摘 要 目的：利用RAW264．7小鼠巨噬细胞株(破骨前驱细胞株)培养系， 研究紫杉醇对体外培养的破骨前驱细胞形成及分化的影响，并通过流式细 胞技术，观察紫杉醇是否通过调亡途径抑制破骨前驱细胞的形成及分化。 方法：选用RAW264．7小鼠巨噬细胞株(破骨前驱细胞株)，进行破 骨细胞的体外诱导培养，观察紫杉醇对破骨细胞形成及分化的影响，并通 过流式细胞术分析紫杉醇是否对破骨细胞凋亡途径有影响。 1细胞培养及药物添加： 1．1细胞复苏和培养： 转／分)，弃去上清液，再加入含10％胎牛血清的仅．MEM培养液10ml，吹 打混匀后使形成单细胞悬液，然后移至培养瓶中，放置于370C、5％C02 培养箱中孵育48—72小时，待培养瓶底细胞密度达到90％以上时，用1％ 胰酶+EDTA将细胞重悬收集细胞于离心管内离心5分钟(1000转／分)， 离心后弃去上清液，再加入含10％胎牛血清的Q．MEM培养液5ml，充分 吹打混匀后使细胞重悬成单细胞悬液，用细胞计数板算出此时的细胞浓 因子sRANKL 胞悬液150ul。将培养板置于37。C、5％C02培养箱中培养，培养5天。 1．2药物的添加：将配好浓度的细胞播种在经灭菌处理的96孔培养板中 (共4行6列)，将第一列作为本次实验的对照组，不添加药物。第二至 每个浓度每列添加4孔。 试剂盒说明操作)，然后在倒置光镜下观察，计算TRAP染色阳性细胞数。 观察紫杉醇对破骨前驱细胞的抑制作用。 中文摘要 3流式细胞术检测细胞凋亡： 3．1细胞培养：将复苏后拟用于流式细胞检测的细胞继续培养，待培养瓶 底的细胞密度达到90％以上时，从培养箱内取出，用1％胰酶+EDTA消化 细胞，然后加入含10％胎牛血清的仅．MEM培养液8ml吹打混匀使细胞重 液，再次加入含10％胎牛血清的仪．MEM培养液5ml，吹打混匀后形成单 细胞悬液，用细胞计数板算出此时细胞原液浓度，然后再根据公式配制成 目的浓度为4．5×104cells／ml的细胞悬液，并向配置好的细胞悬液中加入 sRANKL 子及双抗的细胞悬液播种于24孔板的两孔中，每孔加入500山浓度为 4．5x104 cells／ml的细胞悬液。 3．2药物的添加：在24孔培养板第一孔为对照组，．不添加任何药物。第二 孔选取行TRAP染色后对破骨前驱细胞形成抑制最明显的紫杉醇浓度为 添加药物