组织工程技术修兔颞下颌关节盘穿孔的实验研究.pdf

中山大掌博士掌位论文 组织工程技术修复兔颞下颌关节盘穿孔的实验研究 组织工程技术修复兔颞下颌关节盘穿孔的 实验研究 专 业： 口腔临床医学 博士研究生： 匡世军 博士生导师： 张志光教授 中山大学光华口腔医学院．附属口腔医院 中文摘要 关节盘是颞下颌关节的重要组成部分之一，具有极其重要的生理功能。因关 节盘前移、骨关节病和外伤等原因导致的关节盘穿孔、破碎甚至缺失在临床上十 分常见。由于关节盘组织的再生能力极其有限，关节盘穿孔或破碎后难以自身修 复。若不得到适当的治疗，穿孔的关节盘不但不能被修复，而且穿孔可能因磨损、 关节软骨退行性改变而加重，常常发展成为髁状突骨质破坏、骨赘形成，最终导 致关节疼痛、张口受限乃至整个关节功能的丧失。迄今为止，尚无一种理想的方 法治疗关节盘穿孔或破碎：传统的关节盘摘除术、关节盘成形术、关节盘修补术 及高位髁状突切除术等虽然有一定的治疗效果，但存在很多不足；自体组织移植 可造成附加损伤，且组织来源有限，形状不匹配；异体组织的免疫排斥反应等问 题尚未得到很好的解决；人工替代品的异物反应、感染、松动等问题限制了其临 床应用。因此，探索一种新的修复关节盘穿孔破碎的方法仍然是口腔颌面外科医 生面临的重要任务之一。 随着各相关学科的发展，一门集多学科于一体的交叉学科——组织工程学开 始兴起。其基本思想是从机体获取种子细胞，将体外培养扩增后的高浓度有活力 的种子细胞接种到一种生物相容性好、可生物降解及具有多孔结构的支架材料 中，然后将此细胞一材料复合物植入体内缺损的部位，在支架材料逐步降解吸收 中英文摘要 过程中，种子细胞增殖分化，形成新的具有一定功能和形态的组织，达到修复缺 损重建功能的目的。 因此，组织工程技术有望成为治疗关节盘穿孔或破碎的新方法，本研究试图 探讨了用组织工程技术修复兔关节盘穿孔的可行性。由于组织工程技术需要大量 的种子细胞和良好的细胞支架材料，本研究从种子细胞开始进行研究，观察聚乳 并观察其在体内对关节盘穿孔的修复作用。本实验的研究内容如下： 第1部分兔骨髓问充质干细胞和关节盘细胞的分离培养的实 验研究 实验1兔骨髓间充质干细胞的分离培养及其定向诱导分化的实 验研究 目的： Stem 探索分离培养兔骨髓问充质于细胞(MesenchymalCells，MSC)I构方法， 研究在特定培养液作用下MSC向软骨细胞表形转化，探讨其作为组织工程化软 骨的种子细胞的可行性。 材料与方法： 自兔胫骨上端处抽取4—6mL骨髓后用梯度离心法分离骨髓单个核细胞，进 行原代和传代培养，测定不同代次MSC生长曲线，流式细胞仪测定细胞周期， 透射电镜下观察MSC超微结构。对第3代MSC以TGF·B进行软骨诱导分化对诱导 后的细胞行甲苯胺蓝、免疫组化染色，透射电镜观察诱导后细胞的超微结构。 结果： 24 原代培养的MSCh后开始贴壁，大部分呈圆形、椭圆形，72h可见集落形 成，4—5d可见集落形成，10--14d融合80—90％以上，细胞形态大部分为梭状成 纤维细胞样，少部分成椭圆形。流式细胞仪检测显示MSC84．8％的细胞处于 Go+G1期，电镜观察显示MSC表现出核浆比例大等早期幼稚细胞形态的特点。在 ¨ 中山大掌博士掌位论文 组织工程技术1誊复兔颞下颌关节盘穿孔的实验研究 加入特定诱导液后，细胞增殖速度明显降低，细胞形态呈梭形、多角形、多边形， 周围可见折光性较强的细胞外基质，甲苯胺蓝显示胞浆异染颗粒、II型胶原染色 阳性，电镜观察到细胞核浆比例小，胞浆内细胞器丰富，高尔基体发达。 结论： 兔自体骨髓闾充质干细胞有种子细胞的生物学和形态学基础，增殖较快，在 特定培养液诱导下能向软骨细胞表形转化，有可能成为软骨组织工程较理想的种 子细胞。 实验2兔颞下颌关节盘