自体prp对钛面成骨细胞分化的影响及tgf-β1的变化.pdf

中文摘要 自体PRP对钛表面成骨细胞分化的影响 及TGF-B1的变化． 摘 要 目的：富血小板血浆(PRP)是口腔种植学和组织工程学一个新的应 用，也是临床医师和研究者所关注的领域。它是生长因子的载体，含有大 源性生长因子．AA、血小板源性生长因子．BB、血小板源性生长因子一AB、 血小板衍生血管内皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子．1等，并能影响骨 的再生。TGF．131是作用最为广泛，最受关注的生长因子之一。近年来， 它的最佳浓度具有较大争议。本实验通过研究不同浓度的白体PRP对体外 TGF一131在口腔种植学和组织工程学的临床应用提供合理的浓度和作用时 间作为参考依据。 方法： 1 BMSCs的培养：2—3月龄的新西兰白兔麻醉后，从胫骨平台的骨髓腔 的培养箱内进行培养。 0 2绘制细胞生长曲线：第三代BMSCs接种于24孔培养板，培养1至1 天，每日显微镜下BMSCs计数，然后绘制细胞生长曲线。 向逐级打磨至表面呈金属光泽，用线切割法将抛光钛片切割为直径为 双蒸水分别超声清洗20分钟。 4 PRP的制备：PRP来自兔的全血，采用两次离心法制备。具体制备方 法如下：兔麻醉后，自颈动脉处抽取所有全血约l20ml至盛有3．8％枸橼 酸钠的容器内，分装后，第一次以l100r／rain的速度离心l0min，吸取所 凝血酶)激活，得到富含生长因子的血清。以上所有步骤在两小时内完成。 中文摘要 5成骨细胞鉴定：收集第三代成骨细胞，加入成骨诱导液诱导培养，进 行碱性磷酸酶和钙结节染色鉴定成骨分化能力。 养液；空白对照组无钛片并加入无血清完全DMEM培养液。各组设三复 孔。 7 按照ALP试剂盒操作。 8 旦 里o 染色和DAPI染色，荧光显微镜观察细胞形态的变化。 结果： 1 合，细胞形态为均一的梭形，突起更为明显，漩涡状排列，传代后的细胞 形态比原代细胞更为均一，增殖迅速。根据生长曲线图可知，传代培养潜 伏期一般为2．3d，4．7d为对数生长期，8．10d增殖趋于稳定，达到平台期， 细胞增殖趋于平缓。 2成骨细胞的鉴定：ALP染色和钙结节染色结果呈阳性，ALP染色结果示 胞浆中出现红棕色、棕褐色或咖啡色颗粒，钙结节茜素红染色染色显示橘 红色钙化物，表明细胞具有成骨细胞。 3 中血小板数目的4．2倍(全血为217+43x109／L)。 4 0％PRP组 在显著性差异(尸O．05)；实验组的OD值20％PRP组1 30％PRP组，也存在显著性差异(P0．01)；在第10d20％PRP实验组获 和时间有紧密的关系。 5 表明两步离心法制备的PRP经激活剂激活后可以获得高浓度的TGF．fll。前 中文摘要 ’ 正比。 6细胞免疫荧光染色结果：胞核显示蓝色荧光，胞浆显示绿色荧光，胞 浆呈不规则的多角形围绕在胞核的周围，与成骨细胞的形态一致。 结论： 1 PI冲中含有促进成骨的生长因子，能促进兔自体成骨细胞的生长和分 化。 2 骨细胞分化和碱性磷酸酶的表达。 3 PRP中TGF．[31在第1d大量释放，前3d维持较高浓度，半衰期较短。 关键词：富血小板血浆；转化生长因子．[31；骨髓基质干细胞；成骨 细胞；诱导；增殖与分化 英文摘要 Theeffectof PRPondifferentiationofosteoblaston autologous titaniumandthevariationof TGF—p1 ABSTRACT