TNT及其代谢对大鼠肝微粒体脂质过氧化的影响.pdfVIP

中文摘要 刖 吾 三硝基甲苯(TNT)有6种同分异构体，一般指2，4，6一三硝 基甲苯。(TNT是合成炸药的主要原料，广泛应用于国防、采矿、开 凿隧道和化学工业。TNT中毒是我国常见职业病之一，其毒性作 用范围广，主要引起白内障，肝脏病变和血液损害。虽然TNT的 毒性研究早在20世纪初期开始，但至今删T毒理学机制尚不十 分清楚。近年来，TNT的还原活化学说即自由基机制是研究较深 入的毒性机制之一。TNT是一种可引起氧化应激的毒物，一般认 为，TNT在体内主要通过硝基的还原进行代谢转化：TNT接受来自 NADPH的一个电子，被还原活化为硝基阴离子自由基，在有氧条 件下进一步形成超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢等。使 体内还原物质如谷胱甘肽含量降低，脂质过氧化及钙稳态失衡，导 致膜结构损伤，细胞代谢紊乱甚至死亡。 TNT进入体内经氧化还原形成十几种代谢产物，其中有4羟 胺一2，6一二硝基甲苯(4HA)，4氨基一2，6一二硝基甲苯(4A)， 2，4一二氨基一6一硝基甲苯，2，6一二氨基一4一硝基甲苯等。肝 脏作为重要的解毒器官，在嘲T代谢中起着重要的作用。NADPH 能诱发肝微粒体发生脂质过氧化，酶促微粒体脂质过氧化模型为 理想的研究模型，是探索毒物韵脂质过氧化机理及筛选确实有效 的抗氧化剂的重要手段√目前对于，rNT及其代谢物肝毒性的研 究还很少，本实验建立肝微粒体反应体系，选取MDA为指标，探 索TNT及其代谢物对大鼠肝微粒体脂质过氧化损伤的可能的毒 性机制。 f 实验材料 | i 、1．实验动物 选取健康雌性Wistar大鼠(由中国医科大学实验动物都提 供)，体重200—250克。 2．实验器材与试剂 2．1实验器材 722型分光光度计(上海第三分析仪器厂制造)，LT一92型水 浴恒温振荡器(辽宁省辽阳白塔理化电器厂)，分析天平，586型计 DUPOND USA)和高 T一21高速离心机(SORVALL 算机，SUPER DUPOND USA)等。 速冷冻离心机RC28s(SORYALL 2．2实验试剂 TNT由辽宁阜新煤矿TNT厂提供，经重结晶纯化后使用，纯 度大于99．9％。4HA、4A(由日本提供)，还原型辅酶Ⅱ为BIOM 产品(华美分装)，所有分析试剂均为分析纯。 实验方法 I．大鼠肝微粒体的准备 大鼠禁食12小时，断头处死，经门静脉用冰冷的1．15％KCl 溶液将肝脏洗至淡黄色。以1-3比例制备肝匀浆，匀浆介质为含 0．154mol／L KCl的50mmol／L Tris—HCl(pH7．4)缓冲液。先以 100009离心20分钟，上清液进一步在105000 g离心60分钟。弃 上清，将沉淀悬浮于0．15mol／LTris_HCl含5mmol／LMgCl： ml缓冲液混合后得到的 (pH7．4)缓冲液中，使每克湿重鼠肝与1 微粒体组分悬浮液中每毫升约含有蛋白质10rag。上述操作均在 4。C完成。考马斯亮蓝G一250染色法测定微粒体蛋白浓度，牛血 清白蛋白作为标准。 2．实验分组 ·2· 3．反应体系 TNT、4HA和4A每一剂量组样本数为6，每一样本的总体积 Tris—HCl含5mmo／／L 为Irnl。其中0．15mo／／L MgCl2(pH7．4