亚硝酸细菌amA基因的克隆及表达.pdfVIP

缩写词表 Amp ampicillin 氨苄青霉素 mmoniam 氨单加氧酶 AMo monooxygenase base 碱基对 bp pair dNTP 脱氧核糖核昔三磷酸 E．coli 大肠杆菌 EDTA tetraacetic acid乙二胺四乙酸 Ethylenediamine Gly glycin 甘氨酸 Gly—HCIglycin-HCL 甘氨酸一盐酸缓冲液 IPTG isopropyl—B—D-thiogalactopy—ranoside 异丙基一B—D一硫代半乳糖 kb kiiobase 千碱基 kDa kiloDalton 千道尔顿 ORF frame openreading 开框读码框架 PEG polyethylene 聚乙二醇 glycol PCR ChainReaction Poymerase 聚合酶链式反应 PK ProteinaseK 蛋白酶K r／m rev01utions／minute 转f分钟 SDS sodium sulfate dodecyl 十二烷基硫酸钠 Taq酶Taqpolymerase 耐热DNA聚合酶 TE Tris—EDTA缓冲液 TriS 2-amino一2(hydroxymethyl)1，3-proDanediol 三羟甲基氨基甲烷 TriS—_HCl Tris盐酸缓冲液 X—gal 5一溴一4一氯-3一吲 哚一B—D-半乳糖苷 亚硝酸细菌amoA基因的克隆及表达 摘要 亚硝酸细菌是一种革兰氏阴性细菌，它在自然界的氨氮循环及水体中氨 氮的生物氧化中发挥着重要的作用。氨氮的生物氧化是通过硝化作用完成的。 硝化作用分两步完成：第一步，由铵盐氧化成亚硝酸盐；第二步，由亚硝酸盐 氧化成硝酸盐。由铵盐到亚硝酸盐的氧化是通过亚硝酸细菌完成的，而在此过 AMO)。由氨转 程中直接起作用的酶是氨单加氧酶(ammoniummonooxygenase 化为亚硝酸盐是氨氮生物氧化过程中最关键的一步，而以对于编码这个酶的基 因(amoA)的研究无论在理论上还是在实践上都有重要的意义。 ＼1．亚硝酸细菌的分离筛选与鉴定 、 用亚硝酸细菌选择性培养基对采集到的环境样品进行富集培养两个月后， 采用微孔滤膜过滤和多次将微孔滤膜向新的琼脂平板转移