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亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究 中文摘要 亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究 中文摘要 近年来，非酒精性脂肪性肝病 （nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD ）的发病 率在全球范围内呈快速增长。NAFLD 是代谢综合征的组成部分，其发病机制尚未完 全明确，Day 等提出了二次打击学说，胰岛素抵抗、瘦素抵抗以及氧化应激等在其中 发挥重要作用。NAFLD 目前尚无理想的防治药物。研究表明慢性肝病患者体内支链 氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸）水平显著低于非肝病的对照组，提示支链氨基 酸对于慢性肝病有一定的改善作用。因此，进一步研究支链氨基酸，尤其是亮氨酸对 非酒精性脂肪性肝病的作用及机制是十分必要的。 目的： 研究不同剂量亮氨酸对NAFLD 的影响, 并围绕二次打击学说相关的因素探讨其 可能的作用机制。 方法： 1. NAFLD 模型的建立及亮氨酸对肝脏脂肪变性的直接作用：5 周龄雄性 SD 大鼠 48 只随机分为 4 组，高脂组饲料参照 Harlan 实验室开发的 60%高脂饲料配方，干预 组在高脂饲料基础上分别添加 1.5%、3%、4.5% 的亮氨酸，喂养 16 周。每周记录大 鼠体重、摄食量。实验结束时，观察大鼠肝组织病理学改变，测定血清肝功能指标丙 氨酸转移酶（ALT ）和门冬氨酸转移酶 （AST ）水平。 2. 亮氨酸对 NAFLD 模型大鼠糖脂代谢、氧化应激以及炎症因子的影响：16 周 实验结束时，测定大鼠血清空腹血糖以及空腹胰岛素（FINS ），计算胰岛素抵抗指 数（HOMA-IR ）。测定大鼠肝糖原，血清胆固醇（TC ）、甘油三酯（TG ）、高密度 脂蛋白（HDL-C ）等脂代谢指标水平，总抗氧化能力 （T-AOC ）、总超氧化物歧化酶 （T-SOD ） 、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）、丙二醛（MDA ）等氧化指标以及 大鼠血清中白细胞介素 6 （IL-6 ）、肿瘤坏死因子α （TNF-α ）和C 反应蛋白（CRP ） 的水平。Western blot 检测肝、脂肪代谢相关蛋白固醇调节元件结合蛋白 1 （SREBP1 ） 以及肾周白色脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ （PPARγ ）的表达水平。 I 中文摘要 亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究 3. 亮氨酸对 NAFLD 模型大鼠瘦素通路的影响：16 周实验结束时，测定大鼠血 清瘦素水平。取下丘脑免疫组化法测定其瘦素受体表达。Western blot 法进一步检测 白色脂肪组织中瘦素受体表达以及 JAK2 、STAT3 和 SOCS3 等瘦素信号通路相关蛋 白的表达。 结果： 1. NAFLD 模型的建立及亮氨酸对肝脏脂肪变性的直接作用：（1）干预 16 周后， 4 组大鼠的体重、平均摄食量和主要脏器指数之间无显著性差异。 （2 ）肝组织病理 切片观察到高脂组大鼠肝脏呈现明显的脂肪变性，证实本研究中高脂喂养建立了 NAFLD 的大鼠模型。亮氨酸的干预则逆转了脂肪变性。同时，亮氨酸的干预也显著 降低了高脂组升高的大鼠血清 ALT 、AST 水平。 2. 亮氨酸对 NAFLD 模型大鼠糖脂代谢、氧化应激以及炎症因子的影响：（1） 亮氨酸组较高脂组 FINS 水平均显著降低，但 3 个亮氨酸组之间无显著性差异；亮氨 酸的干预显著降低了高脂组 HOMA-IR 指数。 （2 ）干预 16 周后，4 组大鼠的肝糖原 之间的差异无显著性， 3 个剂量的亮氨酸干预都显著降低了大鼠血清 TC、TG 和 LDL-C 水平，3.0%和 4.5%亮氨酸显著升高肝脏 T-SOD 和 GSH-Px 水平，4.5%亮氨酸 还显著降低了肝脏 MDA 水平。（3 ）高脂组大鼠肝组织中 SREBP1 蛋白表达量由于 亮氨酸的干预显著降低，而肾周白色脂肪组织中的 PPARγ 蛋