四种常见海藻提液免疫调节及对肿瘤细胞体外增殖的研究.pdfVIP

中文 摘 要 四种常见海藻提取物免疫调节及对肿瘤细胞 体外增殖的研究 摘 要 目的:许多海藻不仅营养丰富，而且还含有一些生物 活性物质，如褐藻糖胶，红藻氨酸，褐藻氨酸及海藻多糖 衍生物等。有研究表明，一些海藻及其提取物如藻类多糖、 多肤和藻蓝蛋白等具有明显的免疫调节及抗肿瘤活性，但 目前国内外关于海藻抗肿瘤机制的研究较少，本研究旨在 初步探讨几种常见海藻水溶性提取液的体外免疫调节活 性及抗肿瘤机制，以期为进一步用于肿瘤预防及肿瘤临床 营养治疗提供科学依据。 方法:采用小鼠脾淋巴细胞增殖实验研究了海带等四 种海藻水溶性提取液的免疫调节活性，无菌条件下取小鼠 脾脏，制成小鼠脾细胞悬液，调整细胞浓度为1X106/ml, 接种于96孔培养板，实验孔分别加入不同浓度的四种海藻 提取液，阳性对照剂为ConA(T细胞特异性有丝分裂原) 和LPS(B细胞特异性有丝分裂原)，阴性对照剂为磷酸盐 缓冲液。于5%C02.37℃培养 52h，加入氖一脱氧胸腺嗜吮 核昔(aH-TdR)，再继续培养20h后，收集细胞，测定掺入 细胞DNA内的放射性强度，并计算淋巴细胞转化指数。选 择四种海藻提取液对小鼠脾淋巴细胞增殖促进作用的最 佳浓度，采用生物学方法测定四种海藻提取液刺激小鼠单 核细胞产生肿瘤坏死因子的作用，TNF-a含量采用对 中丈 摘 要 TNF-a敏感的纤维母细胞株 (L929)测定:采用体外抑瘤 实验研究了四种海藻提取液的不同浓度样品对四种肿瘤 细胞 (人红白血病细胞株K562、人卵巢癌细胞株SK-OV 人食管癌细胞株TE-13、小鼠腹水瘤细胞株S180)增殖的 抑制作用，收集处于对数生长期的肿瘤细胞，调整细胞浓 度为1X105/ml，接种于96孔细胞培养板，实验孔分别加入 终浓度为0.625mg/ml,1.250mg/ml,2.500mg/ml和5.000 mg/ml(裙带菜为1.250mg/ml,2.500mg/ml,5.000mg/ml 和10.OOOmg/ml)的四种海藻提取液，阳性对照剂为终浓 度20wg/ml的顺铂，阴性对照剂为磷酸盐缓冲液，于 5%CO2,37℃条件下培养72h，于培养结束前4小时，各培 养孔加入MTT，用酶联免疫检测仪于620nm波长测定各孔吸 光度值，以空白对照孔调零，计算抑制率。采用凝胶层析 法提取并分离了裙带菜的主要成分。实验结果用均数士标 准差来表示，组间比较用单因素方差分析的Dunnett检验， 数据处理用SPSS10.0统计软件分析。 结果: 1.四种海藻的水溶性提取液对小鼠脾细胞的增殖均 有不同程度的促进作用，但不同海藻的促进作用存在着差 别。海带各浓度组对小鼠脾淋巴细胞的增殖均表现有明显 的促进作用，与阴性对照组比较均有显著的意义 (PO.01);裙带菜各浓度组都可显著刺激淋巴细胞的转 化 (PO.01)，且随着剂量的增加，刺激作用有逐渐增强 的趋势;条斑紫菜除0.625mg/ml浓度组外，其它三个浓 度组均能显著促进淋巴细胞转化 (0.313mg/ml, 1.250mg/ml浓度组PO.05,2.500mg/ml浓度组PO.01); 中文 摘 要 坛紫菜各浓度组均能显著促进淋巴细胞转化 (0.313 mg/ml浓度组PO.05，其余三个浓度组PO.01)，并且 存在明显的剂量依赖关系。 2.海藻水溶性提取液在体外能激活小鼠单核细胞并 产生大量TNF，吞噬或杀伤肿瘤细胞，与阴性对照组 (PBS) 比较，四种海藻提取液均可显著刺激小鼠单核细胞产生 TNF-a (PO.01)。 3.海带水溶性提取液除低浓度组 (0.625mg/ml)对 S180细胞和SK-OV,细胞的增殖没有明显抑制作用外，其余 均显示不同程度的抑制作用，低浓度组抑制作用较弱，高 浓度组抑制作用较强。裙带菜水溶性提取液各浓度组对四 种肿瘤细胞的增殖反应均有很强的抑制作用 (P0.O1)1 且随着浓度的增加，抑制作用有增强的趋势，2.500mg/ ml,5.000mg/ml和10.000mg/ml浓度组对S180细胞增殖 的抑制作用与顺铂比较无显著性差异 (P0.05)，抑制率 高达90%以上，10.0