固定化及透性化瑞士乳杆菌L7生产共轭亚油酸的影响.pdf

摘要 ㈣㈣舢HH[[IH Y21421 96 摘要 linoleic acid，CLA)是一系列含共轭双键的亚油酸 共轭亚油酸(conjugated 异构体的混合物的总称。CLA具有抗癌、抗肿瘤、提高免疫力、减少脂肪沉积 的生理活性。天然CLA主要存在于反刍动物的肉和乳制品中且含量很少，因 此，利用生物转化法制备CLA是一个很好的途径。 以本实验室分离保存的一株高产9c，l L7)为材料，首先通过发酵条件优化，提高亚油酸(LA)在发酵液中的生物转 化率，增加9c，11t-CLA的产量，进而对其细胞进行透性化处理以提高细胞膜的 通透性，并对透性化处理细胞进行固定化，研究了固定化细胞的理化性质和转 化特性。主要结果如下： 1)优化了菌种发酵产9厶1It．CLA的最佳条件。确定L．helveticusL7发酵 的最适菌体浓度为5x1010CFU／mL左右。在发酵进行到36h时发酵液中的 9c，1I卜CLA达到最高值。底物LA的最适添加浓度为1 mg／mL。 2)对L．helveticusL7细胞透性化条件进行了研究。分别使用十六烷基三甲 L7 进行透性化处理，结果表明：透性化处理的效果最好的是20％的乙醇，室温下 处理30min，制得的透性化细胞的产率达到468 pg／mL：对超声波细胞破碎法 制得的亚油酸异构酶粗酶液的操作稳定性和贮藏稳定性进行研究，结果表明： h后酶活 粗酶液的酶活操作稳定性较差；保存于4℃时酶活性逐步降低，120 降至初始活性的35％左右。经溶菌酶处理的透性化细胞转化率也较高。透性化 细胞的酶活稳定性较粗酶液有较大提高。 3)应用响应面方法对透性化细胞的最佳固定化的条件进行了优化。结果表 明海藻酸钙胶珠最佳固定化条件为：海藻酸钠浓度1．78％、氯化钙浓度3．13％、 固定化时间60．30rain，利用在此条件下制备所得的固定化胶珠进行发酵， 9c．1ICLA的产量达到561 I．tg／mL。与未固定细胞相比，固定化细胞单次 9c，lI卜CLA产量没有明显的变化，但固定化细胞可多次重复利用，重复利用5 h 摘要 后酶活无明显下降，保留在90％以上，具有较好的贮藏稳定性。电镜观察发现， 固定化胶珠表面及内部为错综复杂的网状结构，能够很好的满足底物和产物的 传递。实验结果表明：经海藻酸钙固定，可以有效提高菌体的重复利用率，从 1t-CLA的生产成本。 而降低9c，1 L7；透性化细胞；固定化细胞；生物转化；共轭亚油酸 关键词：L．helveticus Absract ABSRACT linoleicacidisaseriesofthe linolenic Conjugated mix_tlⅡ℃which(conj