建立IAC-HLC检测谷物中的玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A.pdfVIP

摘要 谷镰刀菌(Fusariwngraminearum)和三线镰刀菌(Fuaariumtricinctum)等真菌所产 生的具有雌激素毒性作用的真菌毒素。 ochraceus)和 赭曲霉毒素(Ocbratoxins)产生茵主要是赭曲霉(Asperillus 纯绿青霉(Penicilliumverr粥oM,of1)，具有肾脏毒性、免疫抑制毒性、神经毒性、 致畸性及致癌性，有A、B、C、D四种化合物。其中毒性最大、分布最广，对 农作物的污染最严重、与人类健康关系最密切的是赭曲霉毒素A(OchratoxinA， InternationalforResearchon OTA)。1993年国际癌症研究机构(TheAgency Cancer，IJ堰c)已将01．A列为可能的人类致癌物。 Performance 本研究分别建立了IAC-HPLC(h衄蚰。柏nnycolumn-I-E【gh Liquid 法检测了49份市售谷物中的珏N含量及20份市售谷物中的OTA含量．现 将研究结果分述如下： 1．建立IAC-HPLC方法检测谷物中的ZEN 1．1抗zEN单克隆抗体免疫亲和柱的研制 将制备好的抗zEN单克隆抗体与溴化氰(cNBr)活化的琼脂糖凝胶 (Scpharose)4FF偶联。采用紫外扫描鉴定偶联反应，间接竞争酶联免疫吸附 LinkedImmunosorbent 法(Enzyme 好的免疫亲合柱。每根抗ZEN单克隆抗体免疫亲和柱，使用O。5mL活化胶， 0．35 mg抗ZEN单克隆抗体，柱容量为0．40陷。 1．2建立IAC-HPLC分析谷物中ZEN含量 该方法线性范围10 p非g～700p∥咯，信噪比为3：1时，最低检测限为lO pg／kg；小麦和玉米样品添加ZEN标准品(60|l眺g～300 pg／kg)，用80％甲酵 水溶液提取样品中ZEN，经免疫亲和柱净化、O．Olmol／L的PBS淋洗、纯甲 醇洗脱，I-口LC荧光法检测。平均回收率分别为76．33％～90．10％和78．36％～ Ⅱ 99．“％，相对标准偏差分别为6．68％～lO．93％和7．28％～10．33％． 1．3市售谷物中ZEN含量的测定 对49份谷物使用本实验建立的IAC．HPLC方法进行了检测，同时使用商 品化ELISA试剂盒进行了对照。二者的结果经统计学分析无显著性差异(P 0．05)。 2．建立IAC-HPLC方法检测谷物中的OTA 2．1抗OTA单克隆抗体免疫亲和柱的制备 4FF偶联。采 将制备好的抗OTA单克隆抗体与CNBr活化的Sepharose 用紫外扫描鉴定偶联反应，间接竞争ELISA方法及HPLC方法评价制备好的 免疫亲合柱。每根抗OTA单克隆抗体免疫亲和柱，使用O．5mL活化胶，O．10 mg 抗OTA单克隆抗体，柱容量为0．15 pg。 2．2建立nC姐LC分析谷物中OTA含量 该方法线性范围0．2 pg／l(g～300pg／kg,信噪比为3：l时，最低检测限为O．2 肛g／kg；小麦和玉米样品添加OTA标准品(5 p班g～100雌／kg)，用70％甲醇水 溶液提取样品中OTA，经免疫亲和柱净化、O．01moFL的PBS淋洗、纯甲醇洗 105．28％，相对标准偏差分别为0．59％～12．83％和10．13％～12．72％。 2．3市售谷物中OTA含量的测定 对20份谷物使用本实验建立的IAC．HPLC方法进行了