槲皮素衍生物的成及其对氧化损伤保护作用的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 flavone)是在植物界中大量存在 槲皮素(quercetin,3，5，7，3’，4’_1)entahydroxy 的一种黄酮类化合物，约有100多种植物含有槲皮素。其具有广泛的药理作用 和生物活性，如抗氧化和清除氧自由基、降低血压、保护心肌缺血、避免缺血 再灌注损伤、增强免疫功能及抗癌、抗菌、抗病毒及镇痛作用等，但该化合物 含有五个极性较大的羟基基团，亲酯性与亲水性都较弱，存在强烈的首过效应， 生物利用度极低，在临床治疗方面应用局限性强。因此本论文以槲皮素为先导 化合物，’根据羟基的化学性质差异，对其进行化学修饰，并研究了合成的槲皮 素衍生物对人脐静脉内皮细胞在氧胁迫下的预防与保护作用。 从改善槲皮素的溶解性、阻断其首过效应出发，本论文选择溴乙酸乙酯以 及氯乙酸乙酯对槲皮素进行酯化修饰，合成了不同取代数的衍生物。利用相位 移催化法进一步合成了三种相对应的羧酸衍生物，并优化了其合成的反应条件。 以氯乙酸乙酯为反应原料，DMF为溶剂，NaHC03为缚酸剂，30℃下恒温搅拌 2h得到了槲皮素衍生物Eaql。以溴乙酸乙酯为反应原料，DMF为溶剂，K2C03 为缚酸剂，30℃下恒温搅拌3h得到衍生物Eaq3，Eaq4。再以纯化后的Eaql， 有合成的化合物都采用IR，MS，13CNMR进行了结构鉴定与表征。 采用H202诱导建立人脐静脉内皮细胞(mⅣEC)氧化损伤模型。将细胞分 为对照组、H202损伤组和药物组。测定了HUVEC的乳酸脱氢酶的释放率、超 氧化物歧化酶、丙二醛(ⅧA)、NO生成量的变化趋势；通过MTT、激光共聚 焦、评估了正常和氧化损伤HUVEC的存活率、细胞形态；运用高效液相色谱法 快速测定药物分子在细胞内的吸收和代谢，并与槲皮素进行对比。主要结果如 下： 1．采用100 lxmol／LH202诱导建立了血管内皮细胞氧化损伤模型，激光共聚 焦显微镜观察的结果表明，细胞形态发生了明显改变，产生了凋亡小体。 2．当槲皮素及合成的衍生物终浓度达到150 gmoFL时，会抑制内皮细胞的 存活，细胞的形态发生明显改变，呈现细胞毒性。 3．槲皮素及合成的衍生物均能修复或者削弱H202对血管内皮细胞产生的 Il 摘要 损伤，能使血管内皮细胞损伤的LDH释放率降低，增强SOD活力，增大NO 的产率，使细胞的清除自由基的能力上升，进而使细胞的脂质代谢产物MDA的 含量减少。 4．采用HPLC测定细胞培养液所含槲皮素及其衍生物的浓度。结果表明，随 着与细胞共同孵育时间的延长，槲皮素及其衍生物不断被细胞吸收(培养液中 其浓度不断下降)，说明此类化合物保护作用的机制可能是它们本身或者相关代 谢产物进入细胞内，利用抗氧化机制降低氧胁迫强度。其中Eaq系列的衍生物 吸收率大于槲皮素。 关键词：槲皮素；溴乙酸乙酯；氯乙酸乙酯；人脐静脉内皮细胞 III Abstract ABSTRACT has to awide of suchas Quercetin possess proven rangepharmacologicalproperties anti-cancer wellasothersseveral activity,antioxidation,cardiovasculareffects，as protective and functions