汞、铬和锰化合雌激素样作用的实验研究.pdfVIP

郯州大学踞学院2003鼎弼上论文 采、塑肇璺垒塑堕塑壅堂望望塑茎鉴型塑 泶、铬和镟化合物雌激素样作用的实验研究 研究生王亚东 导姆吴逸甥陈，j、玉 郑州大学公共卫生学院 劳动卫生职业病学与毒理学教磋室 滔毒辩姹450052 中文撼要 越来熬多翡磺究表鞠，入类懿不囊谜壤效应魏激素谈羲整静癌鹣发疼率舞 磁、免疫系统功能损伤、神经系统功能紊乱及生殖劝能的异常可能与环境中的 巢些化学物嫒肖关。由于这魑化学物袋能干扰肉分泌功能，教也猕环境内分泌 endocrine 予穗耱(environmental 雌激素活性可能是其机制之～。有报邋嵌明某些金属如镉、铅、肖机锡具有内 分泌手魏{挈鬻，嚣生产帮袋活嚣境孛还广泛存在其它鬟金疆蟊汞、镬、镑等， 它们对人类和渤物也有损辫作用。这些撤害作用是否也是通过内分泌干扰作用 巾瓣避激素撵馋鼹，虱翦还没番薅切{薤撼。为站，零秘巍蘧MCF。7人类翼骧瘀 细胞增殖试验、去卵巢大臌予宫增重试验、过氧化翰酶活性测定试验和雌激索 受体竞争结合试验来评价氯化汞、硫酸镟、氯化铬、兰氧化铬的雌激素样作用， 以裙步搽{寸其内分泌予魏佟建，为避一步磷究箕生赡秘发育毒毪撵雳撬髓疆供 实验依据。 郑州夫学医学院2003届硕士论文 汞、铬和锰化台物雌激素样作用的实验研究 方法 1．MCF一7人乳腺癌细胞增殖实验：用无酚红的RPMI一1640培养基(内含活 性炭．葡聚糖处理的10％胎牛血清，30U／100ml胰岛素)调整细胞浓度为 l。贴壁培养24h后，弃 20000～30000／ml，接种子96孔培养板，每孔接种100u 培养液，加入200Itl含有不同剂量受试物、溶剂对照以及阳性物的不含酚红的 RPMI一1640培养基。各剂量均设6个平行孑L，每3d换～次液，培养6d后弃上 pl，放置在培养箱中，4h后，弃孔内液体，每孔 清，每孔加入噻唑兰(MTT)25 u 加入二甲基亚砜(DMSO)150 l。振荡10min后，用酶联免疫检测仪于490nm 波长处测定吸光值。 2．子宫增重试验：大鼠行双侧去卵巢手术后，于第16d随机分5组，每组8 只，分别为阴性对照组(蒸馏水)，低、中、商剂量氯化汞组0．04mg／kg、0．20mg／kg、 1．00mg／kg，阳性对照组雌二醇10011 g／kg，以花生油为溶剂，给药容积为2．0ml／kg 体重，每天腹腔注射一次，连续3d。最后一次给药后24h，称重，颈椎脱臼处 死大鼠，迅速取出子宫，剔除周围结缔组织和脂肪，吸千子宫表面血渍和子宫 内液，于万分之一天平上称量。 5％CaCl2 3．过氧化物酶活性测定：将子宫剪碎后，按l：20(mg／m1)]Jfl预冷 溶液，冰浴中用玻璃匀浆器匀浆，于4℃，12000rpm离心20min，上清液用愈创 木酚比色法测定过氧化物酶活性。 4．大鼠子宫雌激素受体竞争结合试验：性成熟雌性SD大鼠颈椎脱臼处死 后，剥离子宫，预冷生理盐水冲洗，称重，计算所需组织抽提液的体积，剪碎， 加入1：6(mg／m1)预冷的抽提缓冲液，在冰浴条件下用玻璃匀浆器匀浆，于 定胞浆液中蛋白含量；体外雌激素受体竞争结合实验参考朱囤璋方法：多点饱 郑州大学医学院2003届硕士论文 汞、铬和锰化合物雌激素样作用的实验研究 和分析时，总结合反应(totalbinding，TB)管中加入不同浓度的3H-E2，分别为 作单点饱和分析。葡聚糖一活性炭(DCC)法分离游离的和结合的3H—E2后，将