海兔素改善大鼠精性肝损伤的效果及其机制研究.pdf

8．线粒体功能评价：差速离心法制备线粒体，测定线粒体悬液中Mn—SOD的活性和 GSH含量；比色法测定线粒体呼吸酶链复合物(MRC)活性。 9．肝细胞凋亡的评估：采用AnnexinV-FITC／PI双染法检测肝细胞凋亡情况。 亡通路关键蛋白(Bcl一2、Bax、细胞色素C、caspase一3)的变化。 组织中CYP2E1 caspase一9、caspase-3)的mRNA表达水平。 结果： 1．海兔素改善酒精性肝损伤的效果评价 与正常对照组相比，酒精模型组大鼠周体重有轻微下降，肝指数明显增加(P 0．05)；与酒精模型组相比，各剂量海兔素干预组大鼠周体重均有所提高，但海兔素 中、高剂量组大鼠肝指数均显著降低(P0．05)。HE染色病理观察结果显示，海兔 素各剂量组肝脏脂肪变性明显得到改善，炎性细胞浸润减少，与酒精模型组相比较， 中、高剂量海兔素干预组，肝索排列逐渐恢复整齐，组织结构趋向正常。透射电镜 下观察发现，各剂量海兔素组胞浆脂滴数量减少，线粒体病变明显减轻且数目有所 增加，粗面内质网退化与排列紊乱程度有所改善。在本研究中，酒精模型组大鼠血 的血清ALT、AST和ALP的活性升高。此外，长期大量酒精灌胃能使大鼠体内脂质 代谢紊乱，血清TC、TG以及肝脏TG水平升高，而海兔素干预抑制了酒精摄入引 起的这些变化，同时表现出良好的血脂调节作用。 2．海兔素对酒精暴露大鼠硝化应激和肝脏酒精代谢酶的影响 与正常组比较，酒精模型组大鼠血清TNOS和iNOS的活性明显增加，NO含量 兔素组和酒精模型组相比，血清TNOS、iNOS活性以及NO含量均有不同程度地降 低，且成剂量依赖关系，但ADH和CYP2E1活性仪150 mg／kg海兔素组同时抑制了 它们活性的变化。此外，中、高剂量海兔素可明显抑制大鼠肝组织中iNOS的蛋白 表达。 3．海兔素对酒精暴露大鼠肝脏氧化损伤及氧化应激的影响 酒精模型组胞浆NAD+／NADH比值、红细胞膜流动性均较正常对照组显著降低 细胞膜流动性，尤其是100和150 mg／kg剂量组。海兔素干预后可以明显缓解因酒 精诱导的血浆8．OHdG的升高，同时彗星实验表明海兔素组大鼠肝脏分离细胞DNA 损伤程度明显减轻，其尾部DNA％、尾长、尾距和Olive尾距值显著性低于酒精模 升高，相比之下，各海兔素干预组LPO和MDA水平均显示出明显的降低，并且海 性。 4．线粒体介导的内源性凋亡通路在海兔素干预的酒精性肝损伤中的作用 荧光显微镜Annexin V-FITC／PI双染法检测发现，酒精模型组大鼠凋亡的肝细胞 数目明显增加，且多为晚期凋L细胞。而在海兔素处理组，肝细胞凋亡数目明显减 少，且多以早期凋亡为主。线粒体呼吸酶链复合物(MRC)活性检测中，可见海兔素 干预逆转了酒精所致的MRCI，III和IV活性降低，与酒精模型组相比，差异具有 同时，real．timePCR的结果也显示，与酒精模型组相比，随着海兔素作用剂量的增 而Bcl一2基因mRNA表达的量逐渐增加，且差异具有显著性(P0．05)。 结论： 1．根据对肝脏指数、肝脏病理学的观察、肝功能酶的评价以及脂质代谢的检测，初 步证实了海兔素对酒精诱导的大鼠肝损伤具有显著的改善作用。 2．海兔素对酒精性肝损伤的保护作用机制可能与①抑制iNOS活性，下调肝脏iNOS 蛋白表达，减少NO的过量生成；②抑制大鼠肝脏ADH和微粒体CYP2E1活性， 抑制作用且可调节肝脏酒精代谢酶的物质能否成为有效预防和逆转酒精性肝损伤的 药物尚需进一步的实验研究来佐证。 3．海兔素的补充可提高机体抗氧化能力抵抗酒精所致的氧化应激，从而减轻脂质过 氧化以及DNA的氧化损伤，这可能是海兔素拮抗酒精性肝损伤的机制之一。 4．过量的酒精摄入可导致肝细胞凋亡的发生，而海兔素可通过调控Bd．2家族 mRNA的表达，抑制线粒体介导的 活化，降低细胞色素C、caspase．9以及caspase．3 凋亡通路的激活，从而达到对酒精性肝损伤的保护作用。 博士研究生 戈娜(营养与食品卫生学) 指导教师 梁惠教授 关键词：海兔素；氧化应激；肝损伤；线粒体；凋亡