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氡致人支气管上皮细胞线粒体损伤及RNA表达改变 中文摘要 中文摘要 目的：流行病学调查和实验研究证实高浓度氡(IU)暴露和肺癌的发生密切 相关。支气管上皮细胞和细胞核DNA是氡及其子体作用的直接靶细胞和重要靶分 子。线粒体在仅粒子辐射旁效应的调节中起重要作用，而线粒体DNA(mtDNA) 是致癌物作用的重要靶点。本课题在建立的线粒体DNA敲除人支气管上皮细胞 (pHBE)模型的基础上，观察氡及其子体照射对pHBE细胞的损伤效应，同时 采用高通量芯片技术，筛选p+HBE与pHBE细胞间以及氡染毒前后差异表达的 机制提供实验依据。 方法：采用溴化乙锭(EB)诱导法构建P’HBE细胞株，并将其置于特制的氡 PCR测 定p-HBE细胞氡染毒前后线粒体拷贝数，活细胞探针标记线粒体DNA数目、线粒 体形态、线粒体膜电位以及细胞内活性氧(ROS)的水平，用AnnexinV和PI染 采用NimbleGen-135K mRNA和miRNA，并用实时荧光定量PCR进行验证。 胞浆内mtDNA的数量显著减少，线粒体膜电位降低，同时在无尿嘧啶的培养液中 细胞开始大量死亡，表明EB己成功诱导线粒体DNA缺失，建立了p-HBE细胞。 经氡染毒后，p+HBE细胞生长速率加快，克隆形成率和存活分数明显下降，而pHBE 细胞的克隆形成率和存活分数却明显升高，提示线粒体DNA敲除后，pHBE细胞 更易受到氡暴露的损伤，可能促进细胞发生恶性转化。p-HBE细胞中ROS水平低 有其他的来源。pHBE细胞的线粒体膜电位经氡照射后显著下降，表明线粒体的 中文摘要 氡致人支气管上皮细胞线粒体损伤及RNA表达改变 膜结构和功能受到了严重损伤。pHBE细胞染氡后的凋亡率有所升高但明显低于 p+HBE细胞，提示线粒体缺失细胞增殖能力的增强与其凋亡功能的降低存在密切 的相关。pHBE细胞在高剂量氡染毒后S期细胞增加，G1和G2／M期细胞减少， 提示发生了G1期和G2／M期阻滞，延缓细胞进入S期和M期的速度，导致细胞 信号传导通路，下调的基因70％以上影响蛋白质的结合和酶活性。在p-HBE细胞 下调的mRNA主要功能是影响受体信号、信号传导以及蛋白质结合等通路。 株(p-HBE)，并通过观察细胞形态学、营养缺陷和活细胞染色及检测线粒体DNA 拷贝数、线粒体膜电位的改变，了解了pHBE细胞的生物学特性，为研究氡致线 长速度、ROS产生量、线粒体膜电位、细胞凋亡及细胞周期等生物学指标上均出 现了明显改变，表明氡染毒后所产生的细胞损伤效应与线粒体的结构和功能障碍 密切相关，为进一步从分子水平上探讨氡致肺癌的发生机制提供了基础资料。(3) 通过高通量芯片筛选，发现了一批p+HBE与p-HBE细胞间以及氡染毒前后差异表 有助于阐明在氡致肺癌的过程中，核基因组和线粒体基因组所起的不同作用，以 及可能涉及的基因网络和细胞信号通路。 关键词：线粒体；人支气管上皮细胞；氡及其子体：mRNA和miRNA表达谱。 作 者：孙静 指导老师：童建教授 氡致人支气管上皮细胞线粒体损伤及RNA表达改变 英文摘要 ofHuman AdverseEffectofRadononMitochondria Bronchial Cellsand inRNA Epithelial Changes Expression Abstract objective：Both and research