绞股蓝提取物对老机体抗氧化功能及DNA损伤影响的实验研究.pdfVIP

y909387 中文摘要 绞股蓝提取物对衰老机体抗氧化功能 及DNA损伤影响的实验研究 摘 要 背景：绞股蓝(Gynostemmapentaphy]lumMakino)植物在我国约有11种， 其中所含的化学成分丰富。近年来经国内外学者研究证明，绞股蓝含有丰富的 人参皂甙，如人参皂甙Rb．、Rb。、Rd、F：、K和Rg，；多种人体必需的氨基酸和微 量元素，如锗、硒、锌。绞股蓝具有抗衰老、抗溃疡、抑制癌细胞增殖、增强 机体免疫力等多种生物功能，特别是其抗衰老作用日益引起关注。但是，绞股 蓝在DNA分子水平的抗衰老作用及其对细胞凋亡的影响的研究却少有报道。 日的：观察不同剂量绞股蓝提取物抗氧化、延缓机体衰老的效果，检测其 对DNA损伤和细胞凋亡的影响。以便从分子生物学水平探讨绞股蓝提取物延缓 衰老的机理，研究剂量一反应关系，为绞股蓝保健功能的开发应用提供科学依据。 同时拟对本论文所采用的DNA损伤检测方法进行初步分析，为今后开展DNA损 伤的分子流行病学研究提供方法学参考。 克。基础饲料适应性喂养1w后，随机分为6组，每组14～16只，分别为正常 对照组、衰老对照组、维生素E+维生素c组(阻下简称维生素Ec组)、绞股蓝 l组、绞股蓝2组和绞股蓝3组。除正常对照组外，其余各组大鼠每日颈背部皮 下注射D一半乳糖lOOmg／kgBW以建立衰老动物模型，正常对照组皮下注射等量的 生理盐水。正常对照组和衰老对照组大鼠喂饲基础饲料，维生素Ec组在基础饲 期为8周，大鼠自由进食及饮水。实验过程中，定期称大鼠体重，第7周留取 尿液。实验结束后腹主动脉取血进行各项指标的检测分析。 1．大鼠抗氧化能力测定：采用试剂盒测定血浆中超氧化物歧化酶(SOD)、 青岛人学硕=|二论文 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)以及丙二醛(MDA)含量；采用荧光偏振法测定红细 胞膜流动性。 2．大鼠DNA损伤和细胞凋亡测定：分离血样，收集淋巴细胞；取脑、肝脏， 制作石蜡切片。采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测淋巴细胞DNA自发及H：0。诱 导的氧化损伤；用毛细管电泳法测定尿中0L甲基鸟嘌呤(0-MeG)的含量；采用 免疫组织化学法显示Bcl一2蛋白、P53蛋白的表达情况，并利用图像分析技术进 行定量分析。 结果： 1．大鼠抗氧化能力分析结果显示： ①与正常对照组相比，衰老对照组大鼠血浆SOD、GSH—Px活性和MDA含量 与衰老对照组相比，维生素Ec组血浆SOD及GSH—Px活性分别升高至 而绞股蓝3组SOD和GSH—Px活性显著升高，分别达到152．43NU／ml(PO．05) 明绞股蓝提取物可提高D一半乳糖致衰老大鼠血浆SOD、GSH—Px活性，降低MDA 含量。但只有高剂量绞股蓝提取物作用明显，能使血浆SOD、GSH—Px活性及MDA 含量恢复至接近正常水平，与联合补充维生素E、c作用相近。 ②红细胞膜流动性分析结果显示：与『F常对照组比较，衰老对照组、绞股 显著降低(PO．05)；而绞股蓝3组与绞股蓝1组相比，P值、rl值也出现降低 (PO．05)。一说明D一半乳糖致衰老各组P值、n值有随绞股蓝提取物剂量的增加 而降低的趋势，显示膜流动性随之增强。高剂量绞股蓝提取物作用明显，能使 膜流动性恢复至接近正常水平，与联合补充维生素E、C作用相近。 中文摘要 2．大鼠DNA损伤和细胞凋亡测定显示： 发损伤差异无显著性(PO．05)：采用5、10和25umol／LH：0：氧化时，衰老对 但是绞股蓝2、3组DNA氧化损伤与正常对照组及维生素EC组差别无显著性。 ②尿中O虻MeG含量检测结果显示：衰老对照组大鼠尿中O“-MeG含量较其他 各组偏高，但差别无统计学意义(PO．05)。 ③P53蛋白表达检测结果显示：与正常对照组比较，衰老对照组肝和脑P53 衰老对照组肝和脑平均光密度值较其他各组也显著升高(PO．01)，说明P53蛋 白表达强于其它各组。绞股蓝l组较正常对照组和维生素EC组肝、脑平均光密 度值及绞股蓝3组肝平均光密度值均