铜绿假单胞菌多耐药性分子流行病学研究.pdfVIP

摘 要 背景和目的 铜绿假单胞菌是医院内感染的重要病原体，位于医院呼吸道感 染的首位，其多药耐药性已经成为临床治疗的棘手问题。鉴于当前国内外多数研究仅 限于对铜绿假单胞菌单一的临床耐药谱、耐药基因进行探讨，而对铜绿假单胞菌多药 耐药的产生及其相关的危险因素的研究还非常匮乏，本地区未见报道。因此本研究旨 在调查本地临床多药耐药铜绿假单胞菌感染现状及其危险因素，并从分子水平探讨其 感染的同源性和多药耐药的可能机制，从而为有效地预防和控制多药耐药铜绿假单胞 菌感染提供科学的参考依据。 方法 连续收集2008年7月到 2009年7月广州某三甲医院各科室感染的全部 铜绿假单胞菌，剔除重复的病人菌株，根据菌株标本号和病案号，使用统一自制调查 表，对患者病案资料进行数据收集，摘录的内容包括患者基本情况、合并疾病、住院 情况、抗生素使用、侵袭性操作、混合感染其他病原体。采用Kirby-Bauer纸片扩散 法对2009年CLSI规定的A组和B组共13种七大类药物行药敏实验，分析铜绿假单 胞菌的耐药情况，并筛选MDRPA（对3类或以上抗生素耐药铜绿假单胞菌）和NMDRPA， 采用横断面研究方法分析MDRPA感染现状，通过单因素和多因素非条件Logistic回 归分析MDRPA感染的危险因素。 采用随机扩增多态性 DNA(RAPD) 的基因分型方法对铜绿假单胞菌进行基因分型 和同源性分析，并结合流行病学资料，鉴定散发及流行菌株，分析病人交叉感染状况， 追踪传染源，了解传播途径。 采用头孢硝噻吩显色法筛查铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的情况，用改良三维试 验检测AmpC酶和ESBLs酶，并对ESBLs酶PER基因和金属β-内酰胺酶IMP基因进行 PCR扩增检测，初步探讨铜绿假单胞菌耐药的分子机制。 结果 2008年7月到 2009年7月在广州某三甲医院共收集不重复不同患者190 株铜绿假单胞菌。其中67例MDRPA，123例NMDRPA，多药耐药率为35.3%。MDRPA感 染男性占64.2%（43/67），年龄中位数是73.7岁。ICU、呼吸内科、神经内科最多， 分别占19.4%、19.4%、17.9%。主要是呼吸道感染77.6%，其次是泌尿系统感染11.9% 和外伤口感染4.5%。铜绿假单胞菌对抗生素敏感性最低三位是β-内酰胺酶类的ATM 52.6%、TIC 63.7% 、CAZ 69.5%，IMP、TZP、AMK、MEN的敏感性较高，达85%以上。 1 铜绿假单胞菌多药耐药危险因素的单因素分析结果显示：合并高血压、住院时间、 入院病情、入住ICU、使用β-内酰胺酶抑制复合剂、使用碳青霉烯类抗生素、使用喹 诺酮类抗生素、使用抗生素天数、使用抗生素≥3 种、混合感染肺炎克雷伯氏菌、混 合感染嗜麦芽窄食单胞菌、混合感染真菌、合并感染病原体种类数≥4 种、吸痰、吸 氧、气管插管、深静脉插管、导尿管插管、鼻胃饲管插管等 19 个因素与铜绿假单胞 菌多药耐药有关。经过非条件Logistic回归多因素分析得出，入院病情重(OR=2.061, 95%CI 1.116-3.806)、使用β-内酰胺酶抑制复合剂(OR=2.244，95%CI 1.113-3.525)、 深静脉插管 (OR=2.830，95%CI 1.375-5.822) 是铜绿假单胞菌多药耐药的危险因素。 通过RAPD基因分型和同源性分析，铜绿假单胞菌株之间的同源系数在 20%-100% 之间，大部分同源系数小于 80%。铜绿假单胞菌感染方式以内源性感染为主，交叉感 染少。190株铜绿假单胞菌分174种基因型，其中 8种基因型A、B、C、D、E、F、G、 H都为两个病人同源菌株共有。A型的两株同源菌株都在ICU检出，两患者可能在ICU 发生交叉感染，B、C、D、E、F、G、H型同源菌株在不同科室检出。 头孢硝噻吩显色法检测铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶率为92.6%，改良的三维实验 法检测产AmpC酶12.6%、ESBLs酶3.2%、SSBL0.5%、其他β-内胺酶1.1%，总产酶率 为 17.4%。各种产酶率和总产酶在 MDRPA 组和 NMDRPA 组差异无统计学意义。70 株扩 增出PER基因，占36.8%；28株检出IMP基因，占14.7%。但两者在MDRPA和NMDRPA 中检出率差异无统计学意义。 结论 该院铜绿假单胞菌多药耐药率已达到了国内外水平，其形势严峻，应引 起高度重视。铜绿假单胞菌感染方式主要以内源性感染为主