外寒伤肺的理论实验研究.pdfVIP

中文摘要 寒邪是六淫之中常见的致病因素。寒邪由外而入者，称之为外寒。 外寒易伤肺致病，《黄帝内经》中有“形寒寒饮则伤肺”、“肺恶寒’’等经 典理论。检索国内近20年的相关文献，关于寒证的研究较多，而从病因 学的角度系统研究寒邪及其致病机理的较少，且研究不够深入。本课题 拟在中医学病因病机理论的指导下，在对寒邪进行理论回顾基础上，模 拟温度、时间等作用因素，制作外寒伤肺的动物模型，以肺脏作为研究 的靶器官，观察六淫寒邪对小鼠肺脏通调水道、卫外等机能的影响，并 分子机制，为六淫寒邪病因病机理论提供客观的科学实验数据，并为临 床辨证论治提供新的思路和量化检测指标。本课题具有理论创新和一定 的临床指导价值。 1．理论研究 寒是六气之一，乃冬季之主气，是大自然正常的气候变化，正常的寒 气并不致病，若气候变化异常，寒气过重，伤人正气，致人疾病，这种 “不正之寒气中医学上称之为寒邪(淫)，寒邪并不仅仅是一个单纯的 异常气候因素，应该还包括物理、化学因素、气象因素、生物致病因子 等，且与机体的体质、反应性甚或某些基因的表达密切相关。 肺位于胸腔，左右各一，为脏腑之华盖，百脉之朝会，主气司呼吸， 具有宣发肃降之生理特性。通过宣发肃降，通调水道，对体内水液的输 布、运行和排泄起着疏通和调节作用；通过宣发卫气于体表，实现卫外 御邪的功能。 《黄帝内经》记载有：“肺恶寒、“形寒寒饮则伤肺，“重寒伤肺”， 肺恶寒与肺的生理特性密切相关。肺脏通过鼻窍与外界直接相通，且肺 脏清虚娇嫩，在中医学上被称之为“娇脏”，不耐寒袭，肺脏主身之皮毛， 皮毛受寒，亦可内合于肺。 外寒伤肺的基本病机为肺阳受损。肺阳是肺气中具有温煦、推动、宣 发等作用的部分。寒为阴邪，易伤阳气。寒邪客于肺，可使肺阳受损， 肺失宣降，肺行水功能障碍，肺内水液停骤为饮；卫气不能输布于体表， 卫外功能障碍，导致卫外不固。 2．实验研究 2．1实验动物及分组 SPF级昆明种小鼠5 O只，体重17±lg，雌雄各半。常规饲养7天后随 机分为7组：①常温对照组，②4℃7天组，③4℃14天组，④0。C7天组， ⑤0。C14天组，⑥0。C 7天药物治疗组，⑦4℃7天药物治疗组。 2．2实验药物 甘草干姜汤加麻黄，组成：甘草309、干姜309、麻黄209。将上述 三种中药混合经水煎煮、过滤、浓缩，配制成每毫升含生药0．29的水煎 剂，装瓶后置于4℃冰箱密闭保存备用 2．3指标检测 2．3．1一般情况观察 观察小鼠的神态、活动量、口唇耳色泽，皮毛情况以及食量、体重的 改变情况。 2．3．2小鼠肺组织结构观察 采用苏木素伊红(眦)染色法，光镜观察。 2．3．3肺湿干重比值(w／O)计算 W／D=肺湿重／烘干后重量。 2．3．4肺组织AQP．1表达的测定 采用Westernblot法检测。 2．3．5血清lgG和呼吸道液IgG的检测 采用ELISA试剂盒检测。 2．3．6肺组织BAFF表达的检测 采用实时定量荧光PCR检测。 2．3．7肺组织NF．KB表达的检测 采用Westernblot法检测。 2．4统计学处理 数据采用X+S表示，以SPSS 16．0统计软件进行统计分析，采用采用 方差分析和t检验进行统计学处理，P0．05为差异有统计学意义。 3．结果 4。C7天组、4。C14天组，0。C7天组、0。C 14天组小鼠造模期间口唇、 耳朵、尾巴颜色逐渐变苍白，活动量减少，体重增幅减小，部分小鼠体重 7 逐渐减轻，消瘦明显，食量减少。肺组织病理切片显示4。C7天组、0。C 天组小鼠肺组织水肿充血，肺泡腔内有大量水液潴留，并可见炎症细胞浸 润，以上结果符合寒邪伤肺的证候学特点，且肺部病变明显，说明成功复 制了外寒伤肺动物模型。 称量小鼠肺脏的干湿重量，发现与正常对照组相比，4。C7天组、0。C7 天组小鼠肺组织湿干重比值升高(P0．05)。采用West