疏肝健脾、化痰血方对非酒精性脂肪性肝病细胞模型线粒体损伤的干预作用.pdf

中文摘要 目的 成功建立NAFLD细胞模型，并观察疏肝健脾、化痰活血方对NAFLD 体外模型肝细胞凋亡、线粒体膜流动性、膜电位水平、能量代谢、脂质过 氧化等的影响，探讨其对NAFLD体外模型肝细胞损伤的保护作用及其机 制。 方法 将培养的幼鼠肝细胞分为正常组、造模组。正常组细胞用含20％FBS 进行台盼蓝染色计算肝细胞存活率，并用倒置显微镜观察细胞贴壁情况及 形态改变。模型成功后分为3组，即NAFLD细胞模型组(模型组)，水 飞蓟素治疗组(对照组)和中药血清治疗组(中药组)，并分别用水飞蓟 素，疏肝健脾、化痰活血方含药血清干预，化学比色法检测肝细胞活性、 亡率，Westem 荧光分光光度计检测肝细胞线粒体膜流动性、膜电位水平。 结果 1．对NAFLD体外模型细胞活性和TG的影响 与正常组比，模型组细胞存活率明显减少(PO．05)，中药组和水飞蓟 素组细胞存活率比模型组显著升高(PO．01)，与正常组比较无差异 素组比较有显著差异(PO．05)。 2．对NAFLD体外模型肝细胞凋亡的影响 组比，中药组和水飞蓟素组凋亡率和ODA540值均均明显降低，有统计学 or 差异伊O．01P0．05)，中药组凋亡率与水飞蓟素组比较有显著性差异 蛋白表达明显升高(P0．01)。与模型组比，中药组和水飞蓟素组均降低， 3．对NAFLD体外模型肝细胞线粒体膜流动性、膜电位水平的作用 与正常组比，模型组膜电位水平和膜流动性均明显降低(PO．01)。与 模型组比，中药组和水飞蓟素组膜电位水平和膜流动性均升高，有显著性 or 差异(P0．01P0．05)，中药组膜流动性与水飞蓟素组比较有差异 (PO．05)。但中药组膜电位水平与水飞蓟素组比较无差异(P0．05)。 4．对NAFLD体外模型肝细胞线粒体能量代谢的影响 酶和Cyto一0x活性与水飞蓟素组比较无显著性差异(P0．05)。 5．对NAFLD体外模型肝细胞线粒体脂质过氧化的影响 与正常组比，模型组细胞线粒体MDA含量明显升高(Po．oD，水飞 (PO．os)，水飞蓟素组GSH水平与模型组比无差异(PO．05)。 结论 2．疏肝健脾、化痰活血方能有效降低NAFLD体外模型TG水平，提高 损伤的细胞活性，减轻肝细胞损伤； 3．疏肝健脾、化痰活血方能有效降低NAFLD体外模型肝细胞凋亡率， 其机制可能与调节Bcl一2、Bax和Caspase一3蛋白表达有关。 4．疏肝健脾、化痰活血方能有效提高NAFLD体外模型肝细胞能量供 应，改善细胞水平的能量代谢障碍，提高肝细胞线粒体抗氧化水平，改善 线粒体脂质过氧化损伤状态及线粒体膜流动性和膜电位损伤，可能是其减 轻肝细胞损伤的机制之一。 主题词 非酒精性脂肪性肝病； 细胞模型； 线粒体； 疏肝健脾； 化痰活血法； III ABSRTACT Tile：The onthemethod study of mitochondrionin ofnonalcoholic effectinginjured cellmodel fatty liverdisease． of TCM Speciality：internal Lan Author：Zeng Tutor：ShengGuoGuang objecfive the effectofthemethodof Byobservingprotective shuganjianpi， ofnonalcoholicliverdisease huatanhuoxue ce