新生大鼠免疫系统功能的建立及其影响因素的相关性的分析研究.pdfVIP

中文摘要 新生大鼠免疫系统功能的建立与其影 响因素的相关性研究 摘 要 目的：许多研究表明，新生儿处于生理性免疫功能低下 的状态，尤其是早产几，免疫功能更不成熟，造成了感染性 疾病的高发病率与高病死率。另外，许多过敏性疾病、自身 免疫性疾病的发生也与新生儿期耐受反应与免疫应答反应 的发育失衡有关。所以，保证新生儿正常免疫功能的建立， 既降低了新生儿的死亡率，也避免了成年后一些免疫性疾病 (如支气管哮喘、湿疹、食物过敏等)的发生。 新生儿免疫系统中的各类免疫细胞在出生时具有不同 的发育成熟度，达到成熟的时间各不相同，其免疫功能建立 的过程和机制十分复杂，受许多因素的影响，如胎龄大小、 抗原的刺激、母乳中的营养成分和免疫成分、疾病、药物等。 以往的研究大多是在某一特定阶段观察不同抗原刺激后T、 B淋巴细胞的功能，或者辅助细胞／因子的作用。本研究利用 流式细胞仪测定新生大鼠脾脏中CD3、CD20和CD25淋巴 细胞的数量，测定腹腔吞噬细胞吞噬率，空斑形成细胞计数， 放免法测定乳鼠肠道内slgA的含量，从而动态地、全面地 阐述正常新生大鼠免疫功能的建立过程：利用组织细菌培 养，分析细菌在肠系膜淋巴结的移位与CD25／CD3的相互影 响，以及抗生素对新生大鼠上述免疫指标的影响，阐述细菌 抗原和抗生素对新生大鼠免疫建立的影响，从而为临床保 护、促进新生儿正常免疫功能的建立和降低感染率、病死率 中文摘要 提供实验和理论依据。 方法：1动物分组：SD大鼠160只，雌雄不限，窝别不 限，营养中等，生后母鼠喂养，自然断乳。其中包括出生后 0天的SD大鼠40只，出生后3天，7天，14天，30天的 SD大鼠各30只。从40只0天的SD大鼠随机抽取10只作 为抗生素实验组；剩余150只，每同年龄段的SD大鼠随机 分成三个组，每组lO只，共15组，作为对照组，然后各年 龄段取l组，共5组，用于CD3、CD20、CD25阳性细胞的 计数及肠系膜淋巴结细菌移位率的测定，再取各年龄段鼠1 组，共5组，用于做溶血空斑试验，剩下的5组，用于腹腔 吞噬细胞吞噬率的测定。2取材和试验方法：2．1CD3、CD20、 CD25阳性细胞计数：对照组动物分别在生后0天，3天，7 天，14天，30天处死；抗生素实验组从生后0天开始腹腔 注射青霉素(1500单位／克体重／天)，每日～次，连续给药7 天，于生后第7天处死。每只动物取新鲜脾脏，制成单个核 细胞悬液，用流式细胞仪分别计数。2．2溶血空斑试验：绵 羊红细胞腹腔免疫实验动物，4天后处死，取脾脏，制成脾 细胞悬液，荐与绵羊红细胞一同加入琼脂糖，铺于平皿，孵 育后计数平板中的空斑数，算出每100万个脾细胞中的空斑 形成细胞数(PFC)，即为空斑形成细胞数。2．3吞噬细胞吞 噬率：动物腹腔注射淀粉肉汤，3天后腹腔注射鸡红细胞， 30分钟后抽取腹腔液，制成薄推片，Wright氏染色，油镜下 观察每100个吞噬细胞中吞噬有鸡红细胞的吞噬细胞数，即 为吞噬细胞吞噬率。2．4肠道slgA：动物处死后，分别取盲 肠内容物，用放免法检测slgA的含量。2．5细菌移位率：无 菌条件下取肠系膜淋巴结，分别研磨至匀浆，接种于血平板， 中文摘要 只要有细菌生长，即表明该动物发生了细菌移位，细菌移位 率；每组动物发生细菌移位的动物数／10×100％。3统计分析： 所得数据用SAS统计软件分析，数据表达采用均数±标准 差，以P0．05具有统计学意义。 结果：1新生大鼠免疫功能建立1．1细胞免疫功能的建 立：CD3和CD25阳性细胞数量在生后呈逐渐上升的趋势， 表现在CD3计数由生后0天的22．0±2．6逐渐增加到生后7 的0．5±0．6逐渐增加到生后7天的4．9±1．2，30天时达到9．1 ±0．9。1．2体液免疫功能的建立：1．2．1CD20细胞计数在生后 各年龄组段基本维持于8．2±0．7～9．1±0．8，各组之间的数量 比较无统计学意义(P0．05)；1．2．2空斑形成细胞(PFC)计 数：在生后各年龄组段维持于39．7±9．4～50．8±7-3，各组之 间比较无显著差异(P0．05)。13非特异性免疫的建立：腹 腔吞噬细胞吞噬率在生后0天、3天、7天分别为6．2±3．1