抗农作物病原真菌微生物的筛选及其聚酮合酶基因的分析.pdfVIP

第48卷第3期 华中师范大学学报(自然科学版) V01．48No．3 2014年6月 JOURNALOFHUAZHONGNORMALUNIVERSITY(Nat．Sci．) Jun．2014 文章编号：1000一1190(2014)03—0399—05 抗农作物病原真菌微生物的筛选 及其聚酮合酶基因的分析 郭 佳，吴金龙，唐颜苹，谭 晖，赖树锦，李 阳， 杨振飞，陶新园，陈 鑫，李晓华+ (中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室，武汉430074) 摘要：以5种农作物病原真菌为指示菌，从湖北省神农架地区的土壤中筛选得到1株抗真菌放 线菌，命名为ⅡR21菌株．经过形态观察、培养特征、生理生化分析和16SrDNA序列同源性分析， 初步鉴定该菌株属于链霉菌属．发酵液稳定性研究表明：ⅡR21菌株发酵液在一20℃～80℃范围 内具有较强的稳定性；在pH4．o～7．0范围内，11R21菌株发酵液的抑菌活性比较稳定；紫外光照 射对发酵液的抑菌活性没有影响．对放线菌ⅡR21菌株中I型PKS基因族中KS基因进行PCR natalensis相似性 扩增和分析，与其他KS序列相似性比较低，与其系统分类最近的Streptomyces 达77％． 关键词：农作物病原真菌；链霉菌；16SrDNA；I型PKS基因族；KS基因 中图分类号：Q939 文献标识码：A 农作物病原真菌引起的农作物病害，是造成农 本研究以5种农作物病原真菌为指示菌，从神 作物减产的重要原因．农作物病害的传统防治方法 农架地区的土壤中筛选出1株具有较强抗菌活性 是采用化学农药杀灭病原菌，而化学农药对人畜的 的放线菌，对其抑菌活性和发酵液稳定性进行初步 毒副作用和残留问题至今难以解决口]．寻找毒副作 研究，并对PKSI基因族的保守区域KS基因进行 用小、安全有效的农药来防治农作物病害成了农业 克隆和测序分析，为抗农作物病原真菌新药物的开 可持续发展的焦点．放线菌是一类重要的生防菌， 发奠定基础． 能产生抗生素、酶、有机酸等生物活性物质，对病原 1材料与方法 菌具有较强的抑制作用，利用放线菌研发的农用链 霉素、井冈霉素、多效霉素和中生菌素口3等生物农 1．1材料 药已经大量的应用在大田农作物病害防治中，取得 1．1．1土壤样品土壤样品采自湖北省神龙架 了巨大的社会、经济和生态效益． 地区． 聚酮类化合物是放线菌的次级代谢产物，具有 1．1．2菌株大肠杆菌DH5q，农作物病原真菌为 良好的抑菌效果，是现今人们使用和开发的农用抗 稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)、立枯丝核病菌 生素的重要来源[3。4]．大多数的抗生素、抗癌药、免 (Rhizoctonia dahliae kleb)、禾谷镰刀菌(Fusarium 疫抑制剂都是聚酮类化合物，如红霉素、四环素、阿 graminea— 奇霉素、雷帕霉素及农业用途的阿福菌素和莫能星 rum)、葡萄灰霉菌(Botrytiscinerea)．以上菌株均 等[5]．聚酮类化合物的合成是在大型的多酶复合体 由中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委 重点实验室保存．