MicroRNA-17家族真核表达载体的构建及其对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响.pdfVIP

山西医科大学学报，2015年6月 筮 鲞 箜鱼 ·523 · MicroRNA．17家族真核表达载体的构建及其对人肝癌细胞 SMMC-7721增殖的影响 王晓霏 ，孙宏飞 ，陈妍珂 ，赵凌宇 ，杨 阳 ，宋土生 ，黄 辰 (。西安交通大学医学院遗传学与分子生物 学系，西安 710061；西安交通大学医学院心血管研究中心；通讯作者，E-mail~hchen@mail．xjtu．edu．ca) 摘要 ： 目的 构建miR．17家族 (miR-17、miR-20a、miR-20b、miR-93、miR-106a、miR一106b)真核表达载体，探究它们对人肝癌 SMMC-7721细胞体外增殖的影响。 方法 通过EcoR I和Hindm双酶切真核表达载体 pcDNA6．2-GW／EmGFPm·iR，得到 大片段后与人工合成的miR．17家族成熟体5p的寡聚核苷酸连接，通过 DNA测序、BLAST检验以及双酶切电泳方法验证是否 成功构建 miR一17家族的真核表达载体。将构建成功的载体，用Lipofectamine2000瞬时转染人肝癌SMMC-7721细胞，应用 re- a1．timePCR方法检测 miR．17家族表达水平，用 CCK8法检测细胞增殖能力的变化。 结果 双酶切真核表达载体 pcDNA 6．2-GW／EmGFP．miR，得到的大片段与人工合成的miR．17家族成熟体5p寡聚核苷酸连接，通过 DNA测序、BLAST检验及双 酶切电泳的方法验证成功构建了miR-17家族真核表达载体。瞬时转染人肝癌 SMMC-7721细胞后 miR-17家族表达水平有了 显著增加，能够促进 SMMC-7721细胞的体外增殖。 结论 成功构建 miR·17家族真核表达载体，得到瞬时转染 miR一17家族 的人肝癌SMMC-7721细胞 ，并观察到 miR·17家族过表达可以促进人肝癌细胞的增殖。 关键词：miR．17家族； 肝癌；表达载体 ；细胞增殖 中图分类号： R735．7 文献标志码： A 文章编号： 1007—6611(2015)06—0523—05 DOI：10．13753／j．issn．1007—6611．2015．06．006 ConstructionofmicroRNA-17family’seukaryoticexpression vectorsand theireffectsontheproliferationofhumna liver cancercellSMn C-7721 WANGXiaofei，SUN Hongfei，CHENYanke ，ZHAO Lingyu ，YANGYang ，SONGTusheng。 HUANGChen。 (Departmentof ， GeneticsandMolecularBiology， ’an．~aotongUniversityCollegeofMedciine，Xi’an710061，China；CardiovascularResearchCenter， ’ anJiaotongUniversityColelgeofMedciine；Correspondingauthor，E-mail：hchen@mail．xjtu．edu．cn) Abstract： Objective ToconstructmicroRNA-17family’seukaryoticexpressionvectorsandexploretheireffectsontheproliferationof humanlivercancercellSMMC-7721． Methods ThepcDNA6．2．GW ／EmGFP—miR eukaryoticexpression vectorwasdigestedusing HindⅢ andEc0RI，andtheobtainedlargefragmentwas conncetedtomiR·17family5poligonuleotide，nadthenidentifiedbyDNAse— quencing．BL ST testnadelectrophoresisafterdoubleenzymedigestion．，IllemiR-17family’seukar