文心兰一个PEBP家族基因的克隆、表达及载体构建.pdfVIP

江西农业大学学报 2014，36(6)：1380—1386 http：／／xuebao．jxau．edu．en ActaAgricuhuraeUniversitatisJiangxiensis DOI：10．13836／j．jjan．2014220 袁秀云，梁芳，蒋素华，等．文心兰一个PEBP家族基因的克隆、表达及载体构建[J]．江西农业大学学报，2014，36(6)：1380—1386． 文心兰一个 PEBP家族基因的 克隆、表达及载体构建 袁秀云 ，梁 芳 ，蒋素华 ，王默霏 ，刘 佳 ，崔 波 (1．郑州师范学院 生物工程研究所，河南 郑州 450044；2．河南农业大学 生命科学学院，河南 郑州 450002) 摘要：采用 RT—PCR方法从文心兰(Oneidium S‘weetSugar’)中克隆到一个 PEBP家族基因，该基因命名为 On— F 一like(登录号 AHB86975)。该基因编码区531bp，编码 177个氨基酸。蛋 白序列 比对和进化树分析表明， OnFT-like蛋白与蝴蝶兰 蛋白的相似性为99％，进化距离最近。qRT-PCR分析表明，OnFT-like在根和花器 官没有检测到表达；在苗期和花蕾期的叶片和花葶中有表达，其中在花蕾期花葶中的表达量最高；在盛花期和 花后期的叶片和花葶中不表达。分析认为，OnFT-like基因可能在花期转变中起调控作用。将OnFT—like基因 连接到pCAMBIA1301载体上，成功构建了正义和反义植物表达载体，为下一步进行文心兰 OnFT—like基因功 能鉴定及遗传改良奠定基础。 关键词 ：文心兰；PEBP家族 ；实时荧光定量PCR；基因表达；载体构建 中图分类号：Q949．718．43 文献标志码：A 文章编号：1000—2286(2014)06—1380—07 Cloning，Expression andVectorConstruction of A PEBP FamilyGeneinOncidium YUAN Xiu．yun ，LIANG Fang ，JIANGSu．hua ， WANG Mo—fei，LIU Jia ，CUIBo (1．InstituteofBioengineering，ZhengzhouNormalUniversity，Zhengzhou450044，China；2．CollegeofLife Science，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China) Abstract：A PEBP familygenewasisolatedfrom theleafofOncidium ‘SweetSugar’byusingRT—PCR approaches，thegenewasnamedOnFT—like(TheaccessionnumberinGenBank：AHB86975)．Thecodingre— gionofthisgenewas531bp and itencoded 177putativeaminoacidresidues．Multiplesequencealignments andphylogenetictreeanalysesshowedthatOnFT——likewasclosetoFTrfomphalaenopsishybridwith99％ se— quencesimilarity．Theexpressionwasanalysedbyreal—timefluorescentquantitativePCR ，theresultsshowed thattheexpressionofOnFT—likewasnotdetectedinrootsandflowerorgans；theexpressionofOnFT—likewas observedinbothleavesandinflorescencerachisattheseedlingstageandbudstage，andthehighestamountof expressionappearedattheb