尿中苯巯基尿酸反-反式粘糠酸液相色谱联用技术方法的建立与初步应用.pdfVIP

尿中苯巯基尿酸和反一反式粘糠酸 液相色谱质谱联用技术方法的 建立与初步应用 硕士研究生：陈浩 导 师；刘移民主任医师 专 业：劳动卫生与环境卫生学 中文摘要 acid，S．PMA) 在测定低浓度的苯暴露时，苯巯基尿酸(S-phenylmercapmric 和反-反式粘糠酸(transJrans-muconicacid，t,t．MA)都是比较敏感的指标。尿中 t,t．MA作为苯及同系物的代谢产物，是一种公认的职业暴露危险度评价的生物标 记物，反相液相色谱．紫外检测法采用固相萃取(Solid．PhaseExtraction，sPE) 技术纯化样品是同反．反式糕糠酸的测定相适应的，而液相色谱．二级串联质谱 Mass (LiquidChromatography-Tandem 敏度方面更胜一筹，但相对较低的成本和简便的操作是常规实验室分析的重要因 素，通常紫外检测器相对质谱检测器更受青睬，并可以通过改进色谱技术和色谱 条件来弥补实验选择性和灵敏度方面的不足。尿中S．PMA也被认为是一种能够评 价苯及同系物暴露水平的特异而敏感的生物标记物，在低暴露水平下仍然适用。 绝大部分尿中S-PMA的测定方法都是基于色谱分离技术的，高效液相色谱法 (Hi曲PerformanceLiquid 不易挥发的一些有机溶剂，可以连接紫外、荧光或串联质谱检测器。液相色谱质 谱联用法(LiquidChromatography-mass 不足，具有高分离能力，高灵敏度和应用范围更广等特点，越来越受到人们的重 视。 本课题受广州市科技攻关项目(2005Z。EDi31)资助 PhasePerformance 建立反相液相色谱(Reverse High LiquidChromatography， RPHPLC)．紫外检测器测定t,t—MA的方法时，我们一方面选择了成本较低和操 作简便的紫外检测器，另一方面采用了高离子强度的流动相和化学稳定性好的反 相C。固定相。S-PMA的测定方法，采用高选择性的液相色谱并搭配离子阱质谱 检测器，具有良好的敏感性并且避免了复杂的样品处理过程和被分析物的衍生化 过程。 实验结果表明采用高效液相色谱联用技术检测尿中的S-PMA和t,t-MA，实 验方法的灵敏度和特异性高，而且能避免复杂的样品处理过程，为复杂样品的分 析提供了强有力的手段。本研究通过职业卫生检测中心的现有的设备，建立起实 用的检测方法，并初步应用于苯及同系物职业暴露人群及苯暴露大鼠尿样的检 测，为今后国家制定t,t—MA和S-PMA标准检测方法提供依据。 材料和方法 1．尿中t,t．MA反相液相色谱．紫外检测法的建立 根据t,t-MA的理化性质建立反相液相色谱．紫外检测法，通过液一液萃取方式 对样品进行前处理。色谱柱的固定相采用ZorbaxSB-C8柱代替传统的Cs柱，避 免了由于污染而造成柱效率逐渐降低的现象发生；流动相为甲醇、乙晴、磷酸混 合溶液，采用梯度洗脱的方式实现样品的分离。t,t-MA色谱峰通过紫外检测器定 性和定量。 2．尿中S-PMA高效液相色谱一离子阱质谱联用法建立 根据S—PMA的理化性质建立高效液相色谱．离子阱质谱联用法，样品通过液 ．液萃取技术提取后进入色谱柱。色谱柱的固定相采用键合在硅胶上的Cis烷基非 极性固定相，流动相为乙酸铵和甲醇的混合物，采用梯度洗脱的方式实现样品的 分离。以ESI模式进行质谱数据采集，结果可以得到样品的色谱图和质谱图，并 对谱图进行分析和归属。 3．苯及同系物职业暴露人群尿中t,t．MA和S-PMA测定的应用 选择某船厂油漆岗位的职工为暴露组，并分成低暴露组和高暴露组，无苯及 n 同系物和其他职业病危害因素暴露的管理后勤人员为对照组，根据课题要求设计 《职业性苯及同系物暴露个体情况调查表