血浆高分子量激原在内毒素血症中致病作用的初步研究.pdfVIP

血浆高分子量激肽原在内毒素血症中致病作用的初步研究 中文摘要 中文摘要 【研究背景和意义】血浆高分子量激肽原（high molecular weight kininogen, HK ）是血浆激肽释放酶-激肽系统（Plasma kallikrein-kinin system, KKS ）的主要成 分之一。临床研究表明，败血症患者中KKS 被活化，而且HK 被裂解，说明HK 参与败血症的发病过程。但是，迄今对于 HK 在内毒素血症发病中的作用完全不 清楚。本研究使用遗传学方法，对HK 在内毒素血症中的作用进行了系列研究。 【研究目的】认识 HK 在内毒素血症中的致病作用及其对天然免疫的调控机 制。 【研究方法】Kng1-/- 小鼠和其同窝对照野生型小鼠腹腔内注射内毒素 (lipopolysaccharide ，LPS) ，观察小鼠的生存率；应用ELISA 检测血浆中缓激肽（BK ） 和炎症因子的含量；应用实时PCR 检测白细胞和单核细胞炎症因子mRNA 水平； 制作主要器官的组织切片和扫描电镜，观察组织的病理改变；检测支气管肺泡灌 洗液中炎性指标变化。 【研究结果】(1) 应用Western 和RT-PCR 发现Kng1-/-小鼠血浆中HK 蛋白和 肝脏中 HK mRNA 表达均缺陷。Kng1-/-小鼠血浆活化部分凝血激酶时间与野生型 小鼠相比显著延长(56.81±5.428 v.s. 33.64±2.288 seconds, p=0.0004) 。(2) Kng1-/-小鼠 和野生型小鼠腹腔内注射LPS(50mg/kg)48 小时后，Kng1-/-小鼠的存活率比野生型 小鼠明显提高(100% v.s. 10%, p0.001) ，提示Kng1 基因的缺陷对LPS 导致的死亡 具有保护作用。(3) 野生型小鼠在注射LPS 3 小时后，小鼠血浆中缓激肽含量比0 小时明显增高(7896±41.65 v.s. 4476±15.14 pg/mL, p=0.0026)，提示LPS 在体内可以 导致KKS 系统的活化，裂解HK 产生缓激肽。(4) 在LPS 注射4 小时后，Kng1-/- 小鼠血浆中炎症因子的水平比野生型小鼠显著降低(TNF-α: 213.4±100.7 v.s. 760.3±185.8 pg/mL，p=0.0322 ；IL-1β: 138.9±27.19 v.s 519.3± 93.9 pg/mL, p=0.0092； IL-6: 429.4±51.11 v.s 722.1±96.49 pg/mL, p=0.0231) 。(5) 使用流式细胞仪分选出 CD90, B220, CD49b, NK1.1, Ly-6G 阴性表达和CD11b 阳性表达的单核细胞，实时 PCR 检测单核细胞炎症因子mRNA 水平。与野生型小鼠相比，Kng1-/-小鼠单核细 胞炎症因子 mRNA 水平显著降低(IL-1β: 0.622±0.077 v.s. 2.674±0.174, p 0.0095; I 中文摘要 血浆高分子量激肽原在内毒素血症中致病作用的初步研究 IL-6: 0.454±0.048 v.s. 3.255±1.028,p=0.0004) 。(6) 通过HE 染色，电镜观察和检测 支气管肺泡灌洗液评价小鼠急性肺损伤程度。从HE 染色和电镜中可以看出，野生 型小鼠的肺组织间质增生明显，纤维细胞增多，炎性细胞浸润明显，血管扩张， 提示出现典型的肺组织急性损伤，而 Kng1-/-小鼠上述肺组织病理表现明显改善。 与野生型小鼠相比，Kng1-/-小鼠支气管肺泡灌洗液中蛋白含量(0.0436±0.01341 v.s. 4 4 0.1062±0.0093 ug/ul, p=0.0188) 和总细胞数(0.7667×10 ±881 v.s. 1.6×10 ±2640 个,p=0.0404) 明