第十一章电泳技术精要.pptVIP

第十一章 电 泳 Electrophoresis (一）定义 电移动：凡是带电的质点在电场的作用下都会向着各自的异性电极移动的现象，称为电移动。 若带电的质点是离子，就称为离子电泳；胶体颗粒在电场作用下的移动就称为电泳。 自由电泳：带电的胶体颗粒在溶液中的移动。 区带电泳：带电的胶体颗粒在介质（支持物）中的移动。 19世纪初(1808)，俄国物理学家Peňce首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极，加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊，即带负电荷的粘土颗粒向正极移动，这就是电泳现象。 1937年Tiselius利用U形玻管进行血清蛋白电泳，以界面折光率差别分离蛋白，并首次证明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白组成的，即界面电泳（自由界面电泳）。 1948年 Wieland等发明以滤纸作为支持物，使电泳技术大为简化。开创了利用各种固体物质（如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等）作为支持介质的区带电泳方法。 近30年来，由于采用多种新型支持物，仪器装置亦得到不断改进，因此出现了许多新型的电泳技术。 1、按其支持物的物理性状不同： (1) 滤纸及其它纤维电泳：如玻璃纤维膜、乙酸纤维膜、聚胺纤维薄膜。 (2) 凝胶电泳：如琼脂、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶电泳。 (3) 粉末电泳：如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳。 (4) 线丝电泳：如尼龙丝、人造丝电泳。 2、按支持物的装置形式不同： (1)平板式电泳：支持物水平放置，是最常用的电泳方式。 (2)垂直板式电泳：如聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳。 (3)垂直柱式电泳：如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳。 3、按pH的连续性不同： (1) 连续pH电泳：即整个电泳过程pH保持不变，如常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。 (2) 非连续pH电泳：缓冲液和电泳支持物间有不同的pH的电泳，如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳，等电聚焦电泳等。 第二节 电泳原理 （一）电泳的基本原理 设一带电分子在电场所受的力为F则： F = QX 球形分子运动时受的阻力F’为： F’ = 6πrηV 当F =F’时， QX = 6πrηV 移项： V Q X 6πrη 在具体实验中：V = d / t 电场强度： X = E /I 某物质A在电场中移动的距离： dA =VA · Et / I 某物质B在电场中移动的距离： dB =VB · Et / I 两物质移动距离差为： ?d=(dA- dB)=(VA-VB) Et / I (3) 若VA = VB 则?d=0 两者不能分离 若VA ≠ VB 则?d ≠ 0 两者能分离 (二)影响电泳的因素： 1、颗粒性质 颗粒直径、形状及所带电荷量对泳动速度有较大影响。 2、电场强度 电场强度是电泳支持物上每厘米的电位降，也称电势梯度。电场强度对电泳速度起着决定性作用，电场强度越高，电泳速度越快，但随着电压的增加，电流加大，产生热效应，易使蛋白质变性而改变性质影响电泳。 根据电泳所采用电压的不同，可分为常压和高压电泳，进行高压电泳应配备冷却水系统以便在电泳过程中降温。 3、溶液性质 a. 溶液的pH值：决定带电颗粒解离的程度，亦即决定其所带净电荷的多少。对蛋白质两性电解质而言，pH值离pI越远，则颗粒净电荷越多，泳动速度越快，反之则越慢。因此应选择合适的pH，使各种蛋白质所带电荷差异较大，有利于彼此分开，为了使电泳过程溶液pH值恒定，必须采用具有一定缓冲能力的缓冲溶液。 b. 离子强度：影响颗粒的电动电势, 溶液的离子强度越高，电动电势越小，则电泳速度越慢，反之，则越快。 一般最适的离子强度在0.02～0.2之间。离子强度过低，溶液的缓冲能力减弱，不易维持所需pH值，反而会影响颗粒带电荷状态影响电泳。 c.溶液黏度：泳动度与溶液黏度成反比。 4、电渗现象 液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动，称为电渗现象。 例如，在纸电泳时，由于纸上带有负电荷，而与纸接触的水溶液因为静电感应带有正电荷，在电场的作用下溶液便向负极移动并带