第十四章细胞重组及动物克隆技术资料.pptVIP

14. 细胞重组与动物克隆技术 14.1 细胞重组技术 胞质体（cytoplast）：除去细胞核后由膜包裹的无核细胞，由细胞松弛素B处理后，经离心得到。 核体（karyoplast）：与胞质体分离得到的核，带有少量胞质并围有质膜的结构。 胞质杂种细胞：将胞质体和另一完整细胞融合得到的细胞。 杂种细胞：核体与完整细胞融合。 重组细胞：核体与另一种细胞的胞质体融合。 利用细胞融合技术得到的重组细胞 1、2、3亲本细胞 4、6核体 5、7胞质体 8、9杂种细胞 10重组细胞 11胞质杂种细胞 ⅠPEG介导 ⅡHAT培养基筛选 微细胞核移植 微细胞：只有一条或几条染色体和一薄层细胞质，外面包裹一层完整的细胞质膜的核质体。利用秋水仙素先将细胞阻断在染色体中期，然后培养，再用细胞松弛素B处理得到。 以微细胞作供体，通过与遗传性完整的受体细胞融合，可以将微细胞内所含有的几条染色体转移到受体细胞中去。 微细胞 只有一条或几条染色体和一薄层细胞质，外面包裹一层完整的细胞质膜的核质体。利用秋水仙素先将细胞阻断在染色体中期，然后培养，再用细胞松弛素B处理得到。 　微细胞的制作过程如图：  14.2 细胞核移植和动物克隆技术 植物组织培养过程 原理：植物细胞全能性 动物克隆大事记 1938年，德国科学家HansSpemann建议用成年的细胞核植卵子的方法进行哺乳动物克隆。 1952年，英国的Briggs和King开始克隆青蛙，虽未能成功，但开始寻找克隆技术。 1962年，英国剑桥大学的Gurdon宣布他用1个成年蛙细胞克隆出1只蝌蚪，从而引发了关于克隆的第一轮辩论。 1965年，中国实验胚胎学家童第周完成了金鱼核移植并获得成功。 1983年，美国科学家Mcgrath和Solter克隆出小鼠。 1984年，丹麦科学家Willadsen用胚胎细胞克隆出1只羊，这是第一例得到证实的通过核移植技术克隆出的哺乳动物。 1993年，美国的First用牛胚团细胞成功获得克隆牛。 1996年，英国人IanWilmut成功获得体细胞克隆羊“多利”，这是世界上第一例利用成年体细胞核获得的克隆动物。 1997年，中国学者孟励在美国用胚胎细胞克隆猴获得成功。 1998年，一个多国联合科学小组用1个人的腿部体细胞与1个奶牛的卵细胞结合，成功克隆了1个人的胚胎，但只“生活”发育了12d就被有意毁掉。 1998年～1999年，美国人White用珍稀动物盘羊的体细胞核与牛卵结合；韩国的黄禹锡将白头山老虎体细胞核与牛卵结合；我国学者陈大元将大熊猫体细胞核与兔卵结合，均成功克隆出早期胚胎。 2000年，美籍华裔学者杨向中领导的研究小组利用17岁公牛耳部皮肤的成纤维细胞成功获得克隆牛。 2000年，美国科学家成功地克隆出首例灵长类动物——一只恒河短尾猴“泰特拉（Tetra）”。与其它动物克隆不同的是，“泰特拉”未用细胞核移植技术，而是采用胚胎分解的方法，将受精卵培育卵裂至8个细胞时将其分离，每2个细胞分为一部分，共分为4部分，并分别植入4个“代理母亲”子宫中，结果有一个“代理母亲”成功生下了“泰特拉”，这意味着克隆人类已没有技术障碍。 2000年6月22日，我国生物胚胎专家张涌在西北农林科技大学种羊场顺利接生了1只雌性体细胞克隆山羊“阳阳”。“阳阳”经自然受孕后，并于2001年8月8日产下一对混血儿女，雄性叫“欢欢”，雌性叫“庆庆”，都是体细胞克隆山羊“阳阳”与世界首批胚胎克隆山羊交配的后代。“阳阳”的生产可以证明体细胞克隆山羊和胚胎克隆山羊具有与普通山羊一样的生育繁殖能力。 2001年，美、意科学家联手展开克隆人的工作，但遭到国际社会的普遍反对。 什么是动物克隆？ 动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。发育早期的动物胚胎细胞，或成年动物的体细胞，经显微手术移植到去掉细胞核的卵母细胞中之后，在适当的条件下，可以重新发育成正常胚胎。这种胚胎被移植到生殖周期相近的母体之中，可以发育成为正常动物个体。经过核移植而产生的动物，其遗传结构与细胞核供体完全相同。这种不经过有性生殖过程，而是通过核移植生产遗传结构与细胞核供体相同动物个体的技术，就叫做动物克隆。 鱼类的核移植 　　　从1961年开始，童第周等以金鱼和鳑鮍鱼为材料，进行鱼类不同亚科间的细胞核移植获得成功，用以研究杂交细胞核与纯种细胞核在发育功能上的差异，以及细胞质对细胞核的影响． 1979年，中国科学院武汉水生物研究所利用鲫鱼做移核试验。他们把鲫鱼囊胚期细胞经过385天59代连续传代培养后，再将此种培养细胞的细胞核移植到同种鲫鱼的未受精卵中。到1980年4月，他们成功地培育了两尾无性繁殖的幼鱼，其中一条发育正常。