外源基因在转基因苹果中的稳定性及其遗传表现的研究.pdf

IIIIlUlIIIIIIIIIIIMIIIIIII IIIIIIIMIqlIII Y2143676 摘要 外源基因转入植物基因组后，能否在受体植物中稳定表达和遗传是转基因植物能 否商品化的首要条件，这就需要不断观察和检测转基因植株及后代的遗传表现。本试 验选用继代保存12年的转C矽H基因苹果组培苗和定植4．6年的田间转基因植株，研 究外源基因在受体植株中是否稳定存在；调查了转基因植株的花粉和果实特性；对转 基因植株杂交Fl代果实进行种胚培养，研究了外源基因在转基因苹果杂种后代的遗 传分离规律。 主要研究结果如下： 1对继代培养保存12年的嘎拉、王林、乔纳金、富士品种59个株系转Cp刀基 因苹果组培苗分别进行卡那霉素筛选和PCR检测，结果表明：59个株系均可扩增出 @”特异基因片断；除王林2个转化株系部分单株组培苗在50mg／L卡那霉素筛选 时出现白化，表现卡那霉素敏感外，其余转基因株系组培苗均表现出卡那霉素抗性， 说明外源npt刀和Cp口基因可以在长期保存的继代组培苗中稳定存在。 2对定植4～6年的田问转化植株的叶片、根系、花粉、果实进行外源基因PCR 检测，结果表明：嘎拉、王林和富士品种所测转化株系叶片和根系中、嘎拉品种花粉 与果实中C移口基因均稳定存在；而嘎拉品种极少部分株系的根系、花粉和果实中未 检测到CpT／基因，说明C匆口基因可以在生殖器官稳定存在，并具有遗传给后代的能 力。 3外源基因导入后对转基因植株的花粉数量及活力均有影响，不同转基因嘎拉株 系每枚花药的平均花粉量、花粉离体萌发率及花粉活力区别很大，且有显著低于非转 基因对照的趋势。 4以转基因嘎拉苹果与未转化富士苹果进行杂交，采收果实种子进行种胚培养， 确定了适宜苹果种胚离体培养条件为：种子在8℃左右低温下休眠4周，经25℃左右 催芽处理，发芽后的种子用O．1％升汞溶液消毒8．10min，接种于培养基上获得杂交株 系。 5对转基因苹果与非转基因苹果分别做父、母本得到的杂交后代进行卡那霉素筛 选和PCR检测，卡那霉素抗性植株与卡那霉素敏感植株在Fl代植株中表现为1：1分 离，证实npt／／标记基因为一显性杂合基因，可通过有性繁殖在转基因后代植株中稳 定遗传；杂交后代PCR检测表明卡那霉素抗性苗含有的npt刀和Cpr／基因紧密连锁， 在转基因植株杂交后代未发生分离。 关键词：苹果；印口基因；遗传稳定性；花粉特性；果实品质；种胚培养 andGenetic of in Stability Expression ExogenousgeneTransgenicApple Author：ChangTeng—fei Major：Pomology Xiao-xin Supervisor：Shi Abstract Itiscriticalthe for tobecomecommercializationthatthe transgenicplants exogenous Can afterthe needs gene aseries of persiststably transformation，which gene