自体骨膜细胞-酸钙凝胶载体复合体修复骨缺损的定量分析研究.pdf

中文摘要 自体骨膜细胞一藻酸钙凝胶载体复合体 修复骨缺损的定量分析研究 摘 要 目的：由于肿瘤、炎症、外伤和发育异常等导致的骨缺 损在临床上极为常见，骨缺损自身修复能力较低，只能修复 有限大小的骨缺损，自体、异体骨移植作为修复骨缺损最常 用的方法，存在着诸多不足：来源有限、供区结构破坏、功 能受影响、具有免疫原性、传染疾病等，目前开发的骨替代 材料距理想的目标还有很大距离。骨缺损的治疗一直是骨科 领域不断深入研究的课题。组织工程学的发展为这一难题提 供了新的思路和方法。骨组织工程学的研究内容主要包括： 种子细胞、可降解的生物材料、骨生长相关因子。藻酸钙凝 胶是一种理想的组织工程支架材料，藻酸钙凝胶在电镜下扫 描为三维网状结构，其作为细胞载体具有以下特点：良好的 力学性能、化学稳定性、低毒性、低致热源性、低免疫反应 性、确定的空隙率和空隙间距、与细胞有良好的相容性并且 操作可一步完成，同时，它能为细胞生长建立良好的三维空 间结构，有利于氧和营养物质进行交换并排出废物，从而具 有良好的骨传导作用。骨膜含有成骨细胞、骨原细胞及成纤 维细胞等，大量实验证明骨膜来源的成骨细胞成骨能力强，是 较好的种子细胞提供物。骨膜中及骨损伤局部分泌丰富的转 化生长因子(Transforminggrowth 生发蛋白(Bone morphogeneticprotein，BMP)，具有刺激骨膜 细胞分化和饲’膜成骨的作用。藻酸钙凝胶与自体骨膜细胞如 中文摘要 何配比才能达到最佳骨骼生长状态，是实验过程中亟待解决 的难题。本实验在总结前人研究经验的基础上，进一步观察 自体骨膜细胞一藻酸钙凝胶复合体在动物机体中的成骨情 况，并初步探讨藻酸钙凝胶与骨膜细胞的最佳配比。 方法：健康成年新西兰白兔96只，随机分成六组，即A、 组为对照组)，每组16只。手术造成双侧桡骨15mm标准骨 缺损模型，将取下的双侧桡骨骨膜锐性剥离后剪成碎片，混 入5ml的1640液中，用细胞悬液制备器将混合液制成细胞 悬液，800转／分钟离心8分钟浓集细胞，将A、B、C、D、 E组沉淀的细胞分别与藻酸钠溶液充分混匀，体积约为0．4ml (约等于骨缺损体积)，置于模型中，调节A、B、C、D、E 使溶液变成凝胶，并植入自体右侧桡骨缺损模型处。于术后 2、4、8、12周每组随机处死动物4只，将标本仔细去除肌 肉后进行大体观察、 X．线检查、组织学观察，同时测定血 清碱性磷酸酶(Alkaline 结果：通过对比显示：B、C组骨质生长最好，12周时 移植区域存在明显成骨并塑型良好，X片可见清晰的髓腔， 组织切片观察可见清晰的板层骨。A组12周时骨生长良好， X线片见骨塑形稍差，髓腔和骨皮质不清晰。D组有大量骨 痂形成，组织切片见已有清晰的骨小梁出现，但塑形较慢， 12周时还未见明显的髓腔出现。而E组有部分骨痂形成，尚 未连接，中间由纤维结缔组织连接，且无髓腔出现。F组只 在两断端和尺侧缘有部分骨质生长，缺损区被纤维结缔组织 填充。血ALP结果显示：A、B、C、D、E组前8周逐步 中文摘要 上升，表现了活跃的成骨现象，A、B、C上升速度和峰值都 高于D、E组。F组生化值只在前两周稍高。8周时因试验组 骨质生长基本结束，开始了骨质的塑形过程，因而ALP值均 开始下降．12周均恢复正常水平。血清钙结果显示：A、B、 C、D、E组前4周逐步上升，反映了机体对骨折的反应即大 量动员血钙，其中A、B、C上升速度及峰值明显高于D、E 组，F组生化值只在前两周稍高。8周时A、B、C、D、E 组值大幅度下降，其中A、B、C、D下降至正常水平以下， 反映了骨塑形过程，E组稍高于正常水平，说明骨质仍处于 缓慢生长期。12周时骨生长基本结束，血钙水平恢复均恢复 到正常水平。 同时实验观察发现：骨膜成骨细胞在海藻酸钙凝胶载体 中主要以多中心软骨成骨方式生长，并逐步连接、塑形，形 成髓腔和板层骨，骨缺损完全修复。实验发现藻酸钙凝胶无 明显免疫反应，其吸收时间与软骨生长及初步转化成骨时间 相匹配，在早期为骨膜细胞生长建立了良好的支架，而且在 骨膜细胞己形成自己的成骨中心及初步连接后，凝胶同时已 被吸收。藻酸钙凝胶有良好的生物相容