治疗性低温对窒息大鼠心肺复苏后海马神经细胞活性氧及其凋亡与自噬的影响.pdf

治疗性低温对窒息大鼠心肺复苏后海马神经细胞活性氧及凋亡和自噬的影响 中文摘要 治疗性低温对窒息大鼠心肺复苏后海马神经细胞活性氧 及凋亡和自噬的影响 中文摘要 目的：观察治疗性低温（TH ）对窒息致心脏骤停（CA ）大鼠自主循环恢复（ROSC ） 后其海马神经细胞内活性氧（ROS ）产生量和神经功能的关系；并观察低温对大鼠海 马凋亡相关基因 caspase-3mRNA，自噬相关蛋白LC3B 和线粒体自噬标志物 Parkin 表达的影响。 方法：65 只健康成年雄性SD 大鼠随机分为2 组：空白对照组 （BC ，n=5 ）和 心肺复苏组 （CPR，n=60 ）。CPR 组制作窒息法心肺复苏模型，在ROSC 后再随机分 为2 组：常温CPR 组 （NT ）和低温CPR 组 （HT ）。NT 组在ROSC 后保持37℃恒温， HT 组在ROSC 后立即行低温32℃干预4 小时。根据观察时点的不同，再将两组CPR 组随机分2 个亚组：即 ROSC 后12 小时和24 小时组（NT-12，NT24 ，HT-12，HT-24 ）。 到达观察时点先对存活大鼠进行神经功能缺损评分 （NDS ），然后立即取双侧海马组 织，应用流式法检测大鼠海马单细胞悬液ROS 水平。利用透射电镜观察海马神经细 胞细胞核和线粒体的超微结构形态学变化。利用逆转录-聚合酶链反应 （RT-PCR ）技 术测定海马神经细胞caspase-3mRNA 的表达水平；蛋白免疫印迹法 （WB ）测定海马 神经细胞LC3B 和Parkin 蛋白水平。应用SPSS19.0 软件包，计量数据以均数±标准差 （x±s ）表示，两组间均数比较用成组t 检验，多组间比较采用单因素方差分析LSD-t 检验。 结果：60 只大鼠中有44 只 （73% ）成功ROSC ，存活到观察时点的有33 只大 鼠 （55% ）。NT 和HT 组各时点的NDS 明显低于BC 组 （F=8.107, P0.05 ），HT-12 和HT-24 组的NDS 与相同时点的NT 组比较有显著提高（t=9.692, P0.001; t=14.374, P0.001 ）。NT 和HT 组各时点的ROS 产生量明显高于BC 组 （F=16.824, P0.05 ）， 而HT-12 和HT-24 组的升高程度则明显低于相同时点的NT 组大鼠（t=9.836, P0.001; t=7.499, P0.001 ）。NT 和 HT 组各时点的 caspase-3mRNA 表达量明显高于 BC 组 I 中文摘要 治疗性低温对窒息大鼠心肺复苏后海马神经细胞活性氧及凋亡和自噬的影响 （F=24.527, P0.05 ），而HT-12 和HT-24 组的升高程度则明显低于相同时点的NT 组 大鼠（t=6.935, P0.001; t=4.317, P0.001 ）。NT 和HT 组各时点的LC3B-II/I 表达量明 显高于BC 组 （F=6.584, P0.05 ），而HT-12 和HT-24 组的升高程度则明显低于相同 时点的NT 组大鼠（t=10.836, P0.001; t=2.653, P=0.02 ）。NT 和HT 组各时点的Parkin 表达量明显高于BC 组 （F=4.126, P0.05 ），而HT-12 和HT-24 组的升高程度则明显 低于相同时点的NT 组大鼠 （t=4.027, P=0.001; t=5.505, P0.001 ）。NT 组海马神经细 胞核和线粒体的形态学变化较BC 组有明显改变，HT 组海马神经细胞核和线粒体与 相同时点NT 组比较损伤有所减轻。 结论：治疗性低温能减轻ROSC 后大鼠脑神经细胞损伤并提高其神经功能，其 机制之一可能是减少了CPR 后大鼠神经细胞活性氧蓄积量，并通过抑制caspase-3、 LC3B 和Parkin 的表达使神经细胞凋亡和包括线粒体自噬在内的胞内自噬减少。 关键词：治疗性低温；心肺复苏；活性氧；凋亡；自噬 作 者：陆 件