磁性纳米氧化铁修饰的高三尖杉酯碱对白血病细胞的体内外效应的分析研究.pdfVIP

2 磁性纳米氧化铁修饰的高三尖杉酯碱对白血病细胞的体内外效应研究 中文摘要 磁性纳米氧化铁修饰的高三尖杉酯碱对白血病细胞的 体内外效应研究 中文摘要 目的 本课题旨在探索磁性纳米氧化铁 (magnetic nanoparticle of Fe O , 3 4 MNP- Fe O )修饰的高三尖杉酯碱（Homoharringtonine,HHT ）与传统注射剂型对白 3 4 血病细胞杀伤作用的体内外效应研究，为临床试验提供重要的理论和实验依据。 方法 （1）应用CCK8 法分析传统注射剂型 HHT 对白血病细胞系 K562 、HL- 60、SHI-1、NB4 的细胞毒性作用。（2）应用光学显微镜及透射电镜观察不同剂型药物 处理后NB4 细胞形态特征。（3）应用流式细胞术（flow cytometry,FCM ）分别检测 不同剂型药物处理后NB4 细胞凋亡及周期变化；甲基纤维素半固体培养基培养法检 测NB4 细胞集落形成能力；以 transwell 跨膜实验检测NB4 细胞侵袭能力。（4）应 用蛋白免疫印迹法（Western blot, WB ）检测不同剂型药物处理后 Caspase3 、PARP 、Mcl-1 蛋白水平变化。（5 ）通过裸鼠皮下成瘤模型检测不同剂型药 物的体内抗肿瘤效应。 结果 （1）CCK8 结果显示：①HHT 对 K562 、HL-60 、SHI-1、NB4 增殖有明显抑 制作用，且呈现时间-剂量依赖性，对NB4 细胞最为敏感；②不同剂型 HHT 作用于 NB4 细胞 24h 对其增殖抑制，在浓度区间 0.015625-0.125 μmol/L 时，HHT- MNP- Fe O 组抑制率大于 HHT 组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。（2）①光镜下观察 3 4 HHT 和 HHT-MNP-Fe O 作用于NB4 细胞, 可见部分细胞核固缩、核碎裂及凋亡小体 3 4 形成等典型的凋亡形态学改变；②透射电镜下可见空白组细胞完整，胞浆内未见明 显空泡形成。MNP-Fe O 组细胞胞膜内陷形成的囊泡内可见黑色物质， HHT 组大量 3 4 空泡形成，胞核染色质疏松，溶酶体肿胀变形，囊泡内未见黑色物质。HHT-MNP- Fe O 组细胞肿胀，胞核碎裂，染色质疏松，胞浆内可见大量囊泡，其内见黑色颗粒。 3 4 （3）流式结果表明：①浓度 0.0078125μmol/L 作用NB4 细胞 24h ，HHT-MNP-Fe O 3 4 组凋亡率为 18.4±1.33% ，HHT 组凋亡率为 10.73±0.50% （P ＜0.05）。②周期检测发 现 G0/G1 细胞比例 HHT-MNP-Fe O 组为 60.4±1.26%，HHT 组为47.83±1.42% （P ＜ 3 4 I 中文摘要 磁性纳米氧化铁修饰的高三尖杉酯碱对白血病细胞的体内外效应研究 0.05 ）。③ 0.0078125μmol/L 的HHT 及 HHT-MNP-Fe O 作用NB4 细胞 6h 后完善集