选修3 基因工程要点.pptVIP

* 选修 3 现代生物科技专题 专题1、4 基因工程、生物技术 的安全性和伦理问题 一、基因工程 1．DNA 重组技术的基本工具 (1)限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1)功能：能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列并 使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的①______________ 断开。 磷酸二酯键 黏性 平 2)结果：形成②_____末端或③____末端。 (2)DNA 连接酶——“分子缝合针” 1)功能：将切下来的 DNA 片段拼接成新的 DNA 分子。 (3)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 能在宿主细胞中保存下来并大量⑥______ 1)条件 有一个至多个⑦________________ 复制 有特殊的遗传⑧___________，便于筛选 2)种类：⑨_____(常用)、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 T4 DNA E·coli DNA 限制酶切割位点 标记基因 质粒 2．基因工程的基本操作程序 (1)⑩__________的获取：从基因文库中获取、利用 PCR 技 术扩增、人工合成(反转录法、化学合成法等)。 目的基因 (2)基因表达载体的构建——基因工程的核心 1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传 给下一代，并使目的基因能够表达和发挥作用。 2)基因表达载体的组成：目的基因、?_______、?______、 标记基因。 启动子 终止子 (3)将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法 1)导入植物细胞：采用?_______________、基因枪法、花 粉管通道法等。 显微注射技术 2)导入动物细胞：主要采用?_____________。 3)导入微生物：先用 Ca2＋处理再融合。 (4)目的基因的检测和鉴定 目的基因 1)分子杂交技术(DNA 探针＋转基因生物 DNA)：检测是否 有?____________。 2)分子杂交技术(DNA 探针＋转基因生物 mRNA)：检测目 的基因是否?_______。 转录 3)抗原—抗体杂交：检测目的基因是否翻译成?________。 4)对生物进行个体生物学水平的鉴定。 蛋白质 1.获取目的基因和切割载体时使用同一种限制酶，目的 是__________________。 产生相同的黏性末端 2．获取一个目的基因需限制酶剪切___次，共产生___个黏 性末端或平末端。 2 4 考点 DNA 重组技术的基本工具 1．限制性核酸内切酶 (1)来源：多数来自原核生物。 (2)作用特点 ①主要切割外源 DNA，而对自身的 DNA 不起作用，达到 保护自身的目的。 ②专一性：只能识别 DNA 分子中特定的核苷酸序列，且 只能在每一条链中特定的部位进行切割。 (3)作用结果——形成 DNA 片段末端 ①黏性末端：错位切，切下后的两端形成单链末端。 ②平末端：平切，在两条链的特定序列的中轴线处切割， 形成一个无黏性末端的平口。 (4)作用实质：使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 断开。 2．DNA 连接酶 (1)作用实质：恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸 二酯键，使两个 DNA 分子连接成一个 DNA。 (2)常用种类及作用 ①E·coli DNA 连接酶 来源：大肠杆菌 作用：连接黏性末端 来源：T4 噬菌体 ②T4DNA 连接酶 作用：既能连接黏性末端，也能连接 平末端，但后者连接效率低 3．基因的运输工具——载体 (1)作用 ①作为运载工具，将目的基因送入宿主细胞中。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)载体必须具备三个条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切位点，以便与目的基因连接。 ③具有某些标记基因，以便进行筛选。 (3)种类 ①细菌质粒：细菌拟核 DNA 以外的小型环状 DNA。 ②λ噬菌体的衍生物和某些病毒的 DNA。 几种酶的作用部位 (1)作用于①部位的酶：限制酶、DNA 连接酶、DNA 聚合 酶。 (2)作用于②部位的酶：DNA 解旋酶。 (2011 年宁波统考)下列关于 DNA 连接酶和 DNA 聚合 酶的叙述中，正确的是( ) A A．两者催化同一种化学键形成 B．两者催化同一种化学键断裂 C．两者都参与目的基因与载体的结合 D．两者都参与遗传信息的表达 对位训练 考点 基因工程的基本操作程序 (2)获取方法 1．目的基因的获取 (1)目的基因：主要是编码蛋白质的结构基因(人类所需的)。 ①从自然界已有的物种中分离：从基 因组文库或 cDNA 文库中获取 ②人