中国妇女hpv分型标准与宫颈癌防控临床干预方案制定及公共数据.docVIP

附件3 中国疾病预防控制中心妇幼保健中心 “”课题 一、研究背景及立项依据 宫颈癌也是目前所有癌症中病因明确、可早期预防和治疗并彻底根除的癌症。每年大约有50万新发的宫颈癌病例，其中80％的病例发生在发展中国家我国宫颈癌患病率和病死率均约占世界的13，每年新增宫颈癌患者13.15万，约有5万例死于宫颈癌1]。 人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV） 图1 HPV基因组示意图[2] HPV感染是导致宫颈癌的最主要原因。99.7％的宫颈癌患者中可以检测到不同型别的HPV DNA，而无HPV感染者几乎不会发生宫颈癌[3,4]，但是并非所有HPV感染者都会发展为宫颈癌。国际癌症研究署（International Agency for Research on Cancer，IARC），在2004年明确提出，HPV感染是宫颈癌发生的必要因素，没有HPV持续性感染的妇女几乎没有宫颈癌的危险。 HPV有多种基因型（也称亚型），已有 多个亚型被确定，其中约有 40 种涉及生殖道感染，约 20 余种与肿瘤有关。HPV还可引起乳腺癌、肛门癌、阴茎癌、女阴癌HPV高危型有 HPV 16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，68等；常见的HPV低危型有 HPV 6，11，42，43，44等。 HPV基因型在不同地域和人种中的分布具有差异性。例如HPV16在欧洲和北美分布较多；HPV31在南美/美洲中部分布较多；HPV33和45在非洲常见；HPV52和58多分布在亚洲[7]。 目前国际上公认的高危型HPV约有15种[8]，但是HPV高危型只是一个相对概念，多种被认为是低危型的HPV也越来越多的在宫颈癌中被发现。另外也有研究表明，HPV致癌风险有种族差异，例如HPV54型在美国印第安人种是高危型，但在欧美白色人种却是低危型。从高危型HPV的感染到最终发展为宫颈癌的一个显著特点是感染的持续性，如果高危型HPV不是持续稳定的存在于被感染者体内，即使交替感染多种高危型HPV也不会发展为宫颈癌。因此，及早、准确的检测出病人体内的HPV是否为高危型和持续感染是有效预防宫颈癌的关键[8]。 图2 HPV分类示意图与相关疾病 图3 HPV分型树[6] （三）HPV分型技术 1、常见技术 宫颈HPV感染多为隐性亚临床感染，且HPV不能在培养环境中稳定生长，大部分HPV感染无临床症状或为亚临床感染但可致严重后果因此，感染临床或通过常规筛查性传播疾病得以发现，只能通过HPV DNA检测。临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR等目前HPV DNA的检测主要应用分子生物学方法，包括核酸杂交方法和聚合酶链反应(PCR)技术。杂交捕获法（HC）是利用分子杂交化学发光，使信号放大的原理，是目前惟一通过FDA批准的可在临床使用的HPV DNA检测技术。能一次性精确地检测出18种HPV，其中包括13种高危型HPV亚型测定具体的HPV型别以聚合酶链式反应(PCR)为基础的检测方法是用PCR方法先进行目的基因的扩增，然后再用各种方法进行检测）））） 美国资深病理学家Sin Hang Lee根据中国科学院生物化学与细胞生物学研究所洪国藩院士的发明专利[14]发展出来了一种高灵敏、高通量、高覆盖HPV分型检测技术，该技术能够精确、灵敏的测定所有已知型别的HPV。关于其应用于HPV及其它多种致病菌的检测已在欧美等国多种医学科学杂志上发表了详细的研究报告[15-19]，已成为一种成熟的先进技术，并在美国康州医院应用于临床。其原理是在低温下（比常规PCR低10oC，因此克服了常规PCR技术95oC所带来的一系列问题，如：脱氨反应导致的错配等）进行2次PCR反应，特异性的扩增产物直接进行DNA测序，读取HPV的精确DNA序列，再根据美国NCBI基因数据库进行BLAST比对分析。 其优势与特点在于： （1）测序后进行BLAST比对，可以准确得出全部的200多种HPV病毒，不管是高危型、低危型，都能明确得出患者感染的是哪一型的HPV，完全排除假阳性。 （2）临床粗样不需要复杂的纯化步骤，直接进行测序实验；需要的样品量少，只需现有方法用量的2%。这样既减少了费用，增加了检测效率，又减少了不必要的误差。由于使用了中等热稳定性的DNA聚合酶，克服了热稳定DNA聚合酶在GC富集区扩增特异性差的缺陷，使得PCR获得的产物具有高度序列特异性，所以用作测序模板时，没必要从反应混合物中分离PCR产物，简化了实验步骤。该技术大大提高了检测的灵敏度并巧妙的避免了通常PCR过程中存在的污染问题，使得该技术的临床应用非常方便、可靠。这是现有其它所有方法都无法做到的。 （3）该技术对样品的储存，运输要求低，样品可