第11章紫外-可见分光光度法解析.pptVIP

* * 紫外-可见分光光度计 11.3 紫外可见分光光度计 * * 11.3.1 吸光分析法的仪器简介 紫外-可见分光光度计组件 光源 单色器 吸收池 检测器 信号输出 氘灯，185 ~ 380 nm； 钨灯，360 ~ 1000 nm. 基本要求：光源强，稳定，能量分布均匀 棱镜 光栅 玻璃， 350 ~ 2500 nm, 石英，185 ~ 450 nm 平面透射光栅， 反射光栅 玻璃，石英 可见区一般使用氧化铯光电管，适用波长范围为625-1000nm，紫外用锑铯光电管，其波长范围为200-625nm. 表头、记录仪、屏幕、数字显示 1、单波长单光束分光光度计 0.575 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 * * 2.双光束 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。 * * 3.双波长 将不同波长的两束单色光(λ1、λ2) 快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。△?= 1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。 * * 双光束 定性鉴别的依据： 吸收峰数目 吸收峰位置?max 吸收峰强弱?max 吸收光谱形状 吸收光谱的特征 定性鉴别的一般方法：标准对比法 比较光谱特征数据——?max、 ? min 比较A（或?max ）的比值 比较光谱一致性 11.4 定性定量的方法 1、定性分析 对比吸收光谱特征数据 安宫黄体酮(M=386.53) 炔诺酮(M=298.43) ?max=240±1nm ?max=240±1nm 3 3 4 4 对比吸光度（或吸光系数）比值 适用：存在几个吸收峰的样品，可消除仪器、浓度、厚度或其它原因造成的误差。 V-B12鉴别：?max=278、361、550(nm) 中国药典规定：A361/A278 = 1.7~1.88 A361/A550 = 3.15~3.45 对比吸收光谱的一致性 三种甾体激素的紫外吸收光谱 (10?g/ml甲醇溶液） 醋酸泼尼松 醋酸氢化可的松 醋酸可的松 杂质检查 UV-vis纯度检测 吸收峰位置：化合物无吸收→杂质有吸收→检出 吸光系数变化： 化合物强吸收 吸收光谱变形 杂质无(弱)吸收→吸光系数↓ 杂质吸收更强→吸光系数↑ 杂质限量检测 吸光度上限值 肾上腺素与肾上腺酮的紫外吸收光谱 ?max=310nm 肾上腺酮 肾上腺素 峰谷吸光度比值 药典规定：C=2mg/ml, l=1cm, ?max=310nm, A≤0.05 杂质 吸收峰处无(弱)吸收 吸收谷处有吸收 * * 二. 定量分析 依据：朗伯-比耳定律 吸光度： A= ? c l 透光度：-lgT = ? c l 灵敏度高： ?max：104～105 L· mol-1 · cm -1； 例:VB12 ?max 361nm:E1%1cm=207, A=0.414, l=1cm，求C=？ g/100ml 例:样品VB1225.0mg→1000ml， ?max 361nm, E1%1cm=207：A=0.507， l=1cm，求VB12 (%)=? C=25mg/1000ml=0.0025g/100ml =20?g/ml * 物质对光的选择性吸收 ④不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度 A 有差异，在λmax处吸光度A 的差异最大。此特性可作作为物质定量分析的依据。 ⑤在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。 * 07/16/96 * ## 物质分子内部三种运动形式： （1）电子相对于原子核的运动； （2）原子核在其平衡位置附近的相对振动； （3）分子本身绕其重心的转动。 分子具有三种不同能级：电子能级、振动能级和转动能级 三种能级都是量子化的，且各自具有相应的能量。 分子的内能：电子能量Ee 、振动能量Ev 、转动能量Er 即: E＝Ee+Ev+Er ΔΕeΔΕvΔΕr * 07/16/96 * ## 通常可通过调节溶液浓度或改变光程l来控制A的读数在0.15~1.00范围内。 * 07/16/96 * ## 分析化学 Analytical Chemistry 分析化学 武汉科技大学城市学院 * * 第11章 紫外-可见分光光度法 Ultraviolet and Visible Spectrophotometry;UV-vis 基本原理 吸收光谱和分子结构的关系 紫外可见分