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一、ABO血型的测定（直接凝集玻片法) （一)实验目的 了解ABO血型鉴定的原理；掌握玻片凝集试验的方法。 （二)实验原理? 已发现人类红细胞有20多种血型系统，其中ABO血型系统在输血中最为重要，必须血型相合才能输血。血型鉴定是根据人类红细胞表面有不同的血型抗原，故用已知的抗A、抗B单克隆抗体作直接玻片凝集试验，可测定血型。 ? 血型 RBC表面抗原 血清中存在的天然抗体 A B AB O A B A,B 无A,无B 抗B 抗A 无抗A,无 抗B 抗A, 抗B （三)实验材料? 1、诊断用抗A及抗B单克隆抗体试剂各一支。 2、玻片、无菌刺血针、消毒用碘酒、酒精、无菌棉签、牙签，记号笔等 （四)实验方法 1、取洁净玻片一张用蜡笔分成两半，分别标记A、B，然后A侧滴一滴抗A抗体（蓝色)，B侧滴一滴抗B抗体（黄色) 2、被检者耳垂或手指用碘酒消毒，酒精脱碘并凉干后，用刺血针刺血。 3、用牙签刮取两滴血液充分与两种抗体混匀，即可观察结果 （五)实验结果 血 型 鉴 定 结 果 血型 抗A抗体 抗B抗体 A型 B型 AB型 O型 + - + - - + + - （六)注意事项 1、A、B两侧不能混，否则结果不可靠。 2、无菌观念：消毒按一定方向，以一点为中心，由内向外；注意酒精脱碘，否则损伤皮肤、色素沉着；酒精脱碘后，要晾干，否则进针会有烧灼疼痛； 二、试管直接凝集（直接凝集试管法) （一)实验目的? 了解试管凝集的反应；掌握倍比稀释的方法和血清凝集效价的定义。 （二)实验原理? 试管法是一种定量试验的经典方法。可用已知抗原来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。用来协助临床诊断或供流行病学调查研究。用已知的定量抗原与一系列倍比稀释的待检血清，在试管内混合，经一定的时间保温静止后，出现凝集，通过观察各管的凝集程度，可定量检测血清中的抗体水平。通常以产生明显凝集现象的最高稀释度作为血清中抗体的效价，亦称为滴度 （三)实验材料? 1、抗原：灭活伤寒杆菌“H”菌液一管 2、抗体：伤寒杆菌H免疫学清 3、生理盐水 4、试管、吸管、试管架、水浴箱等 （四)实验方法 1、取试管7支，编号1-7,每加生理盐水0.5ml。 2、于第一管中加入伤寒杆菌免疫学清0.5ml，吹吸混匀6次；取出0.5ml加入第二管，吹吸混匀6次；再取0.5ml加入第三管，依次类推至第六管，吸出0.5ml弃之。第七管不加血清，作为对照。 3、各管分别加入伤寒杆菌“H”菌液0.5ml，震荡混匀。 4、置50℃水浴箱温育2小时，轻轻取出试管，观察结果。 （五)实验结果 1、++++：细菌全部凝集，凝集块完全沉于管底，液体清晰透亮。 2、+++：细菌大部分凝集，凝集块沉于管底，液体稍浑浊。 3、++：细菌部分凝集，管底凝集物较前两者少，仍明显，液体半澄清。 4、+：液体浑浊，液体中可见非常小的凝集物，须仔细观察才能发现。 5、—：无凝集物，液体浑浊度与对照管相同。 （六)注意事项 1、取样加样准确。 2、控制温度，过高（超过55℃)，可导致抗体的破坏。 3、由水浴箱取出试管时，勿震动，避免凝集物悬起，影响结果的观察。 4、观察结果要与对照管比较后判断，避免凝集是因为自凝导致的。 三、间接凝集抑制实验（妊娠诊断实验) （一)实验目的? 掌握间接凝集抑制实验的原理及方法；掌握妊娠诊断实验的操作过程 （二)实验原理? 将可溶性抗原或相应抗体预先混合作用后, 再加入该抗原致敏的载体颗 粒，由于抗体已被可溶性抗原结合,阻断了抗体与载体上的抗原作用,不再出现凝集现象,称 为间接凝集抑制试验。孕妇末次月经后40-90天左右尿液中（人绒毛膜促性腺激素)含量增 高，若将一滴孕尿，加一滴抗血清（HCG免疫家兔获得)，充分反应后，再加一滴乳胶抗原， 不出现凝集颗粒，为妊娠试验阳性，反之，则为阴性。 （三)实验材料 1、孕妇尿液、正常尿液 2、胶乳抗原、抗血清（兔抗人HCG的抗体) 3、玻片、牙签、滴管 （四)实验方法 1、取一张玻片，用蜡笔分成两半，标记“+”，“-”。 2、“+”侧加一滴孕尿，“—”侧加一滴生理盐水（作为对照)。 3、两侧各加一滴抗血清（抗HCG)，轻轻晃动玻片0.5-1min。 4、两侧再加一滴胶乳抗原，分别混匀，放置5min，强光下观察结果。 （五)结果观察 1、“+”侧呈均匀浑浊乳液，为妊娠实验阳性； 2、“-” 侧出现均匀一致的白色细沙样颗粒，为妊娠实验阴性 （六)注意事项 1、胶乳抗原使用前应混匀。 2、加入的尿标本、抗血清和胶乳抗原每滴大小一致。 3、加入抗血清后，充分混匀使可溶性抗原与抗体充分反应。 ? ? 实验二 沉淀反应 实验性质：验证性 实验学时：4学时 学生分组人数：4-6人 一、环状沉淀试验(ring precipitation test)：即沉淀