核酸检测培训资料.ppt

SYBR Green法优缺点 优点: 对DNA模板没有选择性 适用于任何DNA?? 使用方便--不必设计复杂探针?? 非常灵敏?? 便宜 TaqMan探针法 TaqMan法优缺点 市 场 状 况 生产厂家 检测项目 使用技术 使用仪器 达安基因 HBV、HIV、HCV、HPV 、TB、HCMV、淋球菌、解脲脲原体、肺炎支原体、沙眼衣原体、单纯疱疹病毒Ⅱ型、ɑ－地中海贫血、缺失型β-地中海贫血、淋球菌、血筛试剂 PCR荧光探针法 PCR-反向点杂交法 荧光定量PCR仪 PCR仪 上海科华 HBV、HCV、新型冠状病毒、血筛试剂 PCR荧光探针法 PCR-酶免 荧光定量PCR仪 酶免相关仪器 匹基 HBV、HIV、HPV、TB、HCV、沙眼衣原体、新型冠状病毒 PCR荧光探针法 荧光定量PCR仪 上海华美 HBV、HCV、TB、沙眼衣原体、新型冠状病毒 PCR荧光探针法 荧光定量PCR仪 上海克隆 HBV、TB、HPV PCR荧光探针法 荧光定量PCR仪 凯普、港龙以HPV检测为主。浩源血筛试剂已进入审批阶段。罗氏、生物梅里埃公司有HIV检测试剂盒，均以各自公司的专利技术为主研发。 现状和趋势 1、现状：公司多、竞争激烈、同质化；手工操作为主；缺乏规范；核心技术少； 2、趋势：管理部门逐渐加强管理，相关标准制订中；进口试剂以全自动诊断平台为主在国内推广，国内厂家渐进推出自动化核酸提取仪器进入市场； 实时荧光PCR检测的难点 1、大规模适合自动化核酸提取的样品制备技术 2、适合筛查应用的多重PCR技术 3、高通量全自动的核酸提取设备和耗材 4、高通量检测设备和配套耗材的成本控制 5、质量控制和质量管理方法 6、核心原料的成本控制 试剂质量控制方法 1、实验室分类和功能化 2、人员培训和自我约束 3、建立切实可行的质量控制方法 和管理体系 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 核 酸 检 测 北京万泰研发中心 2010.04.12 主要内容 为什么要做核酸检测？ 核酸是什么？ 怎样进行核酸检测？ 市场状况 为什么要做核酸检测？ 核酸检测（基因检测） 现知人类的疾病都与基因有直接或间接 的关系。医学实验室所要检测和分析的核酸 既包括人体本身的基因(DNA ) 以及反映基因 转录水平的mRNA , 也包括侵入人体的致病 微生物等所携带的外源性基因(DNA/RNA )。 传统检测试剂（酶免ELISA） 技术特点： 检测目标为蛋白, 所检测的主要是疾病所引发的人体抗体而不是病原体本身,是一种间接、滞后的检测方式。易操作，成本低。 固有不足： 不能够消除对“窗口期”标本(抗体阴性,核酸阳性)的漏检 难于检测病原体的不同亚型及突变型 不典型血清阳转 对免疫逃避或免疫沉寂的标本产生漏检 核酸检测 显著缩短窗口期:HIV窗口期缩短45%，HCV缩 短89%，HBV缩短50%。 提 高 灵 敏 度:理论上扩增体系中单拷贝的模板 也能被检测出。 特 异 性 好:使用荧光探针技术的PCR检测， 几乎没有方法学的假阳性。 直接揭示病原体的存在 对操作者及检测环境的要求较高 检测成本相对较高 输血中可传染病原体的“窗口期” 病毒种类 ELISA检测项目 窗口期 HCV 抗-HCV 2.0/3.0 EIA 8-10周 HIV 抗-HIV-1/2 EIA and HIV-1 抗原 EIA 2-4周 HBV HBVsAg EIA and HBVcAg EIA 6-8周 HTLV 抗-HTLV I/II EIA 8-10周 CMV 抗-CMV EIA 3-5 周 窗口期检测率 国家或地区 HBV HCV HIV 加拿大 1:153000 (~1/15万) 1:2300000 (~1/230万) 1:7800000 (~1/780万) 法国 1:640000 (~1/64万) 1(~1/1000万) 1:3150000 (~1/315万) 德国 1:230000 (~1/23万) 1:670