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种子生产中比较关键的几个问题 菌种保藏： 砂土的产生过程比较复杂我们不谈这一部分。我们谈一谈砂土产生后如何保藏，能够使一个企业长期使用下去，如何保存菌种的问题。 A、菌种保藏的目的：保持种的存活、保持种的纯粹、保持菌株遗传性状稳定。 B、菌种保藏原理：低营养、干燥、缺氧、低温。 C、菌种的保藏方法：我们主要使用冰箱(斜面)保藏法，液氮保藏法、冷冻干燥法。其他还有传代保藏法，载体保藏法等，不过我们不使用，不再多说。 D、菌种的长期使用，一支砂土称为主细胞库，搭成斜面，再根据使用的量埋制成工作细胞库。就这样主细胞库每年使用1-2次，那么就可以使用很长的时间了。种子生产中比较关键的几个问题 种子无菌的保证 谈到种子制备，人们就会想到无菌的概念，因为我们是纯种培养，在种子制备的前期裸露工作的环节比较多，哪一个环节出现染菌问题，那么整个生产就进行不下去，为了保证纯种的安全性，一般在生产上会采取以下几种措施： A、设施方面： 无菌室，有专门的空气净化系统和温湿度控制系统，无菌室的建筑要求墙面平整光滑，耐受清洗和消毒，没有死角，照明灯都是罩在灯罩里面。 B、设备方面 净台：即使在建筑严格的无菌室中，还要使用具有百级（最高级别）洁净级别的超净工作台，在层流风的保护下进行操作。 灭菌柜：种子生产的单位肯定会有灭菌柜。因为生产使用的所有培养基和操作用具都要经过消毒灭菌处理，包括进无菌室穿着的无菌衣，擦地用的毛巾都要经过消毒灭菌 C、人员要求：人员要有较强的无菌意识，不仅要按标准操作规程操作，还要有良好的个人卫生习惯，比如：勤剪指甲，勤理发，换洗内衣等，进无菌室不准佩戴首饰、手表。 D、各种规章制度：既要符合GMP要求又要符合生产使用要求。比如：空气净化系统管理规定，无菌室卫生管理规定，无菌衣清洗消毒管理规定，洁净工具使用管理规定等等 A、斜面质量要求及影响因素 质量：① 斜面种子的外观； ② 斜面种子的内在质量。 因素：① 培养温度； ② 培养湿度； ③ 原材料； ④ 灭菌条件； ⑤ 棉塞； ⑥ 培养时间等等。 种子质量控制及影响因素 B、摇瓶种子的质量标准及影响因素 质量：① 菌体浓度； ② 菌体生长阶段 因素：①培养基组成； ②摇瓶装量； ③摇床转速和在摇床中的位置； ④孢子接种量 种子罐的制备工艺 A、配料：较摇瓶中培养基丰富。 B、接种：火圈接种法和压差接种法。 C、培养 ：种子罐一般都有通气和搅拌，同时控制一定的温度和压力，但是pH在培养基配制时调到合适后，生长过程中不再进行调整，这就要求培养基要有很强的缓冲能力。 种子罐工艺 种子罐种子质量的标准： A、代谢状况：耗糖、耗氮 B、pH变化：pH是代谢状况的综合反映。 C、呼吸活性：呼吸代表菌的生长阶段，一般由菌体释放的二氧化碳量表示。 影响种子罐种子质量的因素： 培养基组成、pH、灭菌条件、上一级种子的质量、接种量、培养温度、通气量、搅拌转速、培养时间等等都影响种子罐种子质量。 如何做一个合格的发酵人 1、无菌意识 2、诚实守信 3、整体（团队）观念 4、广问好学 5、自主创新 无菌意识： 一、做任何工作均要将是否会对无菌造成影响作为首要考虑问题，包括管线安装改造、工艺控制变动、设备的变动等所有工作。 二、还要知道真正的无菌是不可能实现的，无菌只是一个相对的状态，绝对的无菌是不可能实现的，其耗费和对其它质量的影响是现实工作中无法承担的 诚实守信： 由于很多发酵操作无法用仪器仪表进行测量，因此许多操作的完成程度就需要我们一线操作人员去把握，否则很多异常情况无法做出正确的分析。 发酵人常说的一句话：发酵是个良心活！ 整体（团体）意识： 一、发酵是微生物的一个群体的生长，不能从个体来考虑。 二、发酵的协作是一个整体工作的体现，所有地方全做好结果会好，有一个地方出现问题可能发现不了，但最终结果必然受到影响。 三、发酵过程中外界环境因子太多，考虑问题时必须予以全面考虑 广问好学： 发酵本身涉及的领域较广，因此作一名合格的发酵工作人员应掌据的知识很多，要求博不要求全精，一般需了解：微生物相关知识：如普通微生物、工艺调控等。化学知识：有机化学、无机化学、生物化学等。设备机械知识：化工原理、生物工程设备、生物反应器物理知识：普通物理、热力学知识、生物物理（生物流体力学、生物控制和信息论、生物物理技术）自动化仪表、仪器分析等计算机知识、生物统计学、生物实验设计等等 自主创新： 我们要总结经验加强学习，但不能盲从于经验和书本上的知识，对任何问题都要有自已的