微生物降解香菇栽培料中的棉酚资料.pptVIP

姓名：包刘媛 学号：20111052112 可行性分析 课题背景、意义、思路 材料与方法 参考文献 目 录 一、课题背景、意义、思路 1、背 景： ①香菇营养丰富，味道鲜美，并具有药用价值。分布广，尤其是云南地区。大量种植香菇给千家万户带来了丰厚的回报。香菇的栽培方式主要有段木栽培、袋料栽培两种，而袋料栽培是最为通用的。但是香菇在收获之后剩下了大量的栽培袋料，虽然香菇栽培袋料中含有大量的蛋白质，粗脂肪，纤维素等营养成分，是一种非常好的资源，但是由于使用棉籽壳作为其主要原料，它含有一定量的有毒物质-棉酚，会对动物生产、发育和繁殖等产生不良的影响，因此不能将其再使用，成为一种废弃物和污染源，造成巨大的浪费。 ②国家在饲料卫生标准中规定肉用仔鸡，生长鸡配合饲料中的游离棉酚的允许量不得大于100 mg／kg，肉用仔猪，生长肥育猪配合饲料中的游离棉酚的允许量不得大于60 mg/kg．欧盟对单胃动物日粮中游离棉酚允许量的规定与中国标准一样，除此之外还规定了反刍动物日粮中游离棉酚允许量，其成年牛，山羊，绵羊≤500 mg／kg，犊牛≤100 mg／kg，其他不含棉籽饼粕饲料和配合饲料≤20 mg／kg．因此如果将香菇栽培袋料作为饲料再利用，必须除去栽培袋料中的棉酚，既可作为饲料在利用。 ③传统棉酚脱毒主要可分为物理脱毒法，化学处理法等．然而物理脱毒法脱毒率低，化学法会造成溶剂残留等缺点，因此近几年新兴的棉酚脱毒方法主要是微生物发酵法脱毒． 2、意 义： 本课题尝试从饲料允许添加的微生物菌种中，筛选出最优的菌种和发酵方式，通过发酵过程条件优化，获得符合国家标准的新饲料源，并提高其营养价值和利用率． 3、思路： ①、由于棉籽饼发酵脱毒常用的菌株为黑曲霉，乳酸菌，酿酒酵母，而本研究主要目的是对香菇栽培袋料中的棉籽壳进行脱毒，所以选用以上三种菌种进行单菌发酵及复合发酵处理。 ②、由于温度、含水量、接种量因素的影响，所以要设置不同的条件进行试验。 ③、若由上两点组合控制变量试验，工作量太大，可以先设定一个常规条件用上述三种菌种进行单菌发酵及复合发酵处理，看其脱毒效果。若效果明显再进行控制变量单因子优化试验。 二、材料与方法 1、材料 ①样品：香菇栽培料（由楚雄种植香菇处提供，样品均粉碎后备用。） ②设备：培养箱，高压蒸汽灭菌锅，超声波仪，离心机，真空抽滤仪，研磨机，冰箱等． ③仪器：陶瓷盘，量筒，滴管，容量瓶，三角瓶，试管等。 ⑤试剂：棉酚标准品(含99％纯棉酚)，浓盐酸，丙酮，间苯三酚，95％乙醇等。 ⑥菌种：干酪乳杆菌(Lactic acid bacteria T7)，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，黑曲霉(Aspergillus niger) C（对照组） R:干酪乳杆菌组 J:酿酒酵母组 H:黑曲霉组 R+J（1:1） R+H（1:1） H+J（1:1） H+J+R（1:1:1) 条件：温度37℃， 接种量10%， 含水量50%， 20g/组香菇栽培袋料 ①微生物固体发酵： 将栽培袋料和菌种搅拌均匀后，盖上6层润湿纱布防止灰尘，放人恒温培养箱中37℃发酵48 h，结束后60℃烘干，48h后存放于干燥器中待测。 2、方法 ②、游离棉酚测定方法： A、棉酚标准溶液的制备．准确称取0.005 g棉酚标准品，用70％丙酮溶液溶解，并用50 mL容量瓶定容，溶液棉酚浓度100μg/mL． B、显色剂的配置：用100mL量筒量取16.6mL浓盐酸(12.0mol/L)，加入95％的乙醇至100 mL刻度，倒入100 mL三角瓶中，摇匀，再加入1 g间苯三酚，溶解后混合置于三角瓶中放入冰箱中备用(显色剂颜色变黄时不能使用，现配现用)． C、标准曲线的绘制．准确吸取100μg/mL棉酚标准溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL加入10mL试管内，编号1-6号,再依次加入70％丙酮溶液1.0,0.8,0.6,0.4,0.2,0 mL，各试管中再加入2 mL显色剂，摇匀，在55℃恒温水浴箱中加热5 min．用70％丙酮溶液调零，在550 nm波长处测定吸光值并绘制标准曲线，得其回归方程。 D、样品棉酚含量的测定．准确称取样品1.0g于具塞锥形瓶中，首先加入约15 mL丙酮溶液，盖上瓶塞，超声15min，9000 rpm条件下离心，将上清液回收于100毫升试管中静置，重复以上步骤两次，用中速滤纸将回收的上清液过滤于50 mL容量瓶中，丙酮溶液洗涤并定容．移取滤液1 mL于试管中，各加入2 mL显色剂，摇匀，测定550nm 处吸光值，计算滤液棉酚含量． E、样品棉酚含量计算． 计算公式：Y=（X*Z）/(n*m)式中，y为样品中游离棉酚的含量(mg/kg)；X为测定用样