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酶分子的修饰方法 一、酶的表面化学修饰 （一）大分子修饰（大分子结合修饰） 是目前应用最广的酶分子修饰方法。 1.定义：利用水溶性大分子与酶结合，使酶的空间结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性与功能的方法。 酶分子的修饰方法 （一）大分子修饰 1、非共价修饰 使用一些能与酶非共价地相互作用而又能有效地保护酶的一些添加物，它们既能通过氢键固定在酶分子表面，也能通过氢键有效地与外部水相连，从而保护酶的活力。 一些添加物，如多元醇、多糖、多聚氨基酸、多胺等能通过调节酶的微环境来保护酶的活力。 另一类添加物就是蛋白质。蛋白质分子之间相互作用时，其表面区域内排除了水分子，因而增加了相互作用力，其稳定性也就增加了。 酶分子的修饰方法 （一）大分子修饰 2、共价修饰 用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通过共价键连接于酶分子的表面，形成一层覆盖层。 例如：用聚乙二醇修饰超氧物歧化酶 ，不仅可以降低或消除酶的抗原性，而且提高了抗蛋白酶的能力，延长了酶在体内的半衰期从而提高了酶药效。 大分子修饰(共价)的过程 修饰剂的活化：作为修饰剂中含有的基团往往不能直接与酶分子的基团进行反应而结合在一起。在使用之前一般需要经过活化，然后才可以与酶分子的某侧链基团进行反应。 修饰：将带有活化基团的大分子修饰剂与经过分离纯化的酶液，以一定的比例混合，在一定的温度、pH值等条件下反应一段时间，使修饰剂的活化基团与酶分子的某侧链基团以共价键结合，对酶分子进行修饰。 分离：需要通过凝胶层析等方法进行分离，将具有不同修饰度的酶分子分开，从中获得具有较好修饰效果的修饰酶。 酶分子的修饰方法 （一）大分子修饰 3. 应用： 如：PEG－超氧化物歧化酶（SOD） PEG－溶血类蛋白质（链激酶、尿激酶等） PEG－天门冬酰胺酶（ASNase） 消除了抗原性、延长了酶在体内的半衰期 又如：用葡聚糖修饰?-淀粉酶，??－淀粉酶，胰蛋白酶、过氧化氢酶，提高了酶的热稳定性。 酶分子的修饰方法 （二）小分子修饰 （酶蛋白侧链基团修饰） 1、定义 通过选择性的试剂或亲和标记试剂与酶分子侧链上特定的功能基团发生化学反应。 酶分子的修饰方法 （二）小分子修饰 侧链基团：组成蛋白质氨基酸残基上的功能团。主要有：氨基、羧基、胍基、巯基、酚基、咪唑基。 1、侧链基团修饰剂：采用的各种小分子化合物。 20种不同氨基酸的侧链基团中只有极性氨基酸的侧链易被修饰，它们一般具有亲核性。 酶分子的修饰方法 （二）小分子修饰 1、侧链基团修饰 根据氨基酸侧链R基的极性，20种氨基酸可分成4类。 （1）、非极性R基氨基酸（共8种）： 丙氨酸(Ala),亮氨酸(Leu),缬氨酸(Val), 异亮氨酸(Ile),苯丙氨酸(Phe),色氨酸(Trp),甲硫氨酸(Met),脯氨酸(Pro) 酶分子的修饰方法 （二）小分子修饰 1、侧链基团修饰 根据氨基酸侧链R基的极性，20种氨基酸可分成4类。 （2）、无电荷的极性R基氨基酸（共7种）： 丝氨酸(Ser), 苏氨酸(Thr),酪氨酸(Tyr), 半胱氨酸(Cys),天冬酰胺(Asn),甘氨酸(Gly), 谷氨酰胺(Gln) 酶分子的修饰方法 （二）小分子修饰 1、侧链基团修饰 根据氨基酸侧链R基的极性，20种氨基酸可分成4类。 （3）、带正电荷的极性R基氨基酸（共3种）： 赖氨酸(Lys), 精氨酸(Arg),组氨酸(His) 酶分子的修饰方法 （二）小分子修饰 1、侧链基团修饰 根据氨基酸侧链R基的极性，20种氨基酸可分成4类。 （4）、带负电荷的极性R基氨基酸（共2种）： 天冬氨酸(Asp),谷氨酸(Glu) 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * Chapter 5 Directed Evolution and Modification of Enzyme Molecule 酶的分子修饰和定向进化 崔建东 博士 Cjd007cn@163.com 酶的结构 酶活性中心（activity site) 酶的活性中心包括两个功能部位：一个是结合部位，是酶与底物结合的基团，决定酶的专一性；另一个是催化部位，催化底物敏感键发生化学变化的基团，决定酶的催化能力。但这两个部位并不是各自独立存在的，相互联系。 酶的结构 维持活性中心应有空间构象所必需的基团 影响底物中某些化学键的稳定，催化底物发生化学反应并