常用实验方法和所需试剂的配制教程分析.docVIP

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2016-04-23 发布于湖北
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常用实验方法和所需试剂的配制教程分析.doc

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（一）estern-blot实验 1. estern blot主要实验试剂溴酚蓝（Bromphenol Blue）丽春红（Ponceau S）考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue R-250）吐温-20（Tween-20） β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol) 十二烷基硫酸钠（SDS ）过硫酸铵（APS） TEMED 聚丙烯酰胺凝胶单体贮备溶液 4×浓缩胶缓冲液 4×浓缩胶缓冲液甘氨酸 Tris碱脱脂奶粉牛血清白蛋白（BSA）硝酸纤维素膜（NC膜）蛋白质Marker和预染 Marker 通用蛋白裂解/提取试剂 BCA法蛋白定量试剂盒 Bradford法蛋白定量试剂盒兔源性抗抗体辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG ECL超敏发光液定影液、显影液、X光胶片曝光盒其他试剂（乙醇、甲醇、冰醋酸、二甲苯、戊二醛等） 2. Western-blot主要实验试剂的配制方法（1）10%SDS溶液: SDS粉末1g,加双蒸水10mL使其溶解，室温保存。（2）10%APS：APS 20mg,加双蒸水200μL,混匀，现配现用。（3）10×电极缓冲液（PH8.3）: SDS粉末10g、Tris碱30.4g、甘氨酸144g，双蒸水定溶至1000mL，4℃保存，用时10倍稀释。（4）考马斯亮蓝固定液：乙醇500mL、冰醋酸10mL、双蒸水定溶至1000mL。（5）考马斯亮蓝脱色溶液：95%乙醇250mL、冰醋酸80mL，双蒸水定溶至1000mL。（6）考马斯亮蓝染色溶液：0.29g考马斯亮蓝,溶解于250mL脱色液中，过滤后室温保存。（7）转移缓冲液：甘氨酸2.93g、Tris碱5.812g、甲醇200mL、去离子水定溶至1000mL，4℃保存。（8）10×TBS溶液：Nacl87.75g、Tris碱12.1g，用双蒸水溶至1000mL，4℃保存，用时10倍稀释。（9）TBST溶液： 1×TBS溶液1000mL、Tween-20溶液1mL，混匀。（9）丽春红溶液：100g丽春红,5mL冰醋酸，双蒸水定溶至100mL，室温保存。（11）5×上样缓冲液：1mol/LTris-HCl(pH6.8) 0.6mL、甘油2.5mL、10% SDS溶液2mL、β-巯基乙醇（使用前加）0.5mL、1%溴酚蓝溶液1mL，去离子水定溶至10mL，4℃保存。（12）12%分离胶：聚丙烯酰胺单体贮备液3.2mL、4×分离胶缓冲液0.5mL、10%SDS溶液80μL、10%APS溶液25μL、TEMED原液10μL、双蒸水溶至8mL。（13）5%浓缩胶：聚丙烯酰胺单体贮备液0.68mL、4×浓缩胶贮备液0.25mL、10%SDS溶液40μL、10%APS