抗原抗体的反应祥解.pptVIP

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第七章 抗原抗体反应的应用 免疫分析方法是利用抗原与抗体特异性反应的特性对抗原或抗体进行量或质的测定分析。这类分析方法具有特异、灵敏和快速的特点,有的可以表现出一个氨基酸分子的差异,如用单克隆抗体进行检测的方法;测定的量可以达到μg甚至ng的水平,如ELISA法,放射免疫法等;反应在几小时,几分钟甚至更短的时间可以看到测定的结果,如免疫沉淀法等。 这类免疫分析的方法可以用于医学,免疫学中抗原抗体的分析(包括病原的诊断,免疫细胞表面分子的检测等),而且可以广泛的用于生命科学的几乎各个领域,甚至于食品科学,环境科学及分析化学等更为广泛的学科领域。 一、免疫沉淀与免疫凝集 1.溶液中的沉淀反应 在体外,当抗体与相应抗原二者浓度比例适当时,会发生免疫沉淀(immunoprecipitation)反应,表明两者之间有特异性反应。免疫沉淀反应广泛用于抗原或抗体的定性及定量分析。在液相中形成的沉淀不易观察判断,利用抗原和抗体溶液之间的界面形成的沉淀线便于判断,即环状沉淀试验(ring precipitant test)(图7—l0)。沉淀试验可以在玻璃管中进行,将小试管或毛管的底部加入抗原溶液,在上层轻轻铺上不同稀释倍数的抗体溶液,勿使界面破坏,为了使界面更好地形成,常在下层抗原溶液中加入10%的蔗糖或甘油。抗原抗体溶液置于37℃或4℃孵育后,在界面上形成白色沉淀线。玻片上沉淀的形成必须在显微镜下观察。 2.凝胶扩散沉淀 抗原抗体可在半透明的半固相介质中进行沉淀实验。抗原分子和抗体分子在凝胶介质中自由扩形成浓度梯度,抗原与抗体在比例合适的一定扩散部位相遇形成沉淀线。凝胶沉淀可用于测定抗原或抗体的相对浓度,也可用于比较不同抗原的特异性、纯度及相互关系。最常用的方法为单向免疫扩散(radial immuno diffusion )和双向免疫扩散(double-immunodiffusion)。 5.免疫凝集 颗粒性抗原(红细胞、细菌、 乳胶颗粒等)与抗体特异性结合,形成肉眼可见的凝集块。 全物素是小分子化合物(相对分子质量为224),能通过双功能连接剂能与抗原、抗体、酶等大分子上氨基、羧基及糖基共价结合。—个大分子上可以标记数个生物素分子。链亲和素是相对分子质量为6.8×l04的大蛋白质,可用酶、荧光素等标记。标记后的生物素不影响其与亲和素的结合,因此在免疫分析中得到广泛的应用。一些不易制备抗体的生物大分子如核酸及多糖也常用亲和素—生物素复合物(avidinn—biotin complex,ABC)系统检测。如用生物素标记核酸探针,用于核酸杂交的分析。此外,小分子药物地高辛(digoxin)也可用于标记许多生物大分子,再用地高辛作半抗原免疫获得的相应抗体进行检测。用生物素、地高辛等小分子化台物标记技术,在分子生物学实验中得到广泛的应用,统称为非放射性标记分析技术。 发光免疫分析(luminescent immunoassay,LIR)也是近年发展起来的一项免疫分析新技术。用发光物质标记抗体或抗原。其反应原理与ELISA、RIA、FIA 等类似。根据发光物的来源不同,有化学发光(che’miluminessence)和生物发光(bioluminescence)不同方法。 一些化学发光剂如荧光醇(1uminol),可用于标记抗原或抗体,反应时发光剂发生高能化学反应,形成处于电子激发态的分子,当这些产物分子回到基态时,伴随着光子的释放,发生化学发光现象。荧光醇在标记过程中易丢失发光能力,异荧光醇(iso1uminol)相对更稳定一些。一些发光分子的发光反应需要阳离子或酶的催化,还有一些化学发光分子如吖啶酯 (acridine ester)则不需催化剂的作用,只需在酸性条件下用过氧化氢诱导化学发光。目前把化学发光剂与发光增强剂结合使用,使光强度达到X光胶片曝光的要求。 生物发光常见的反应系统为虫荧素(luciferin)在虫荧酶(lucifase)的催化下,有ATP,Mg2+及O2存在.发生瞬时发光反应: 发光反应可用瞬时荧光仪检测记录,也可用胶片显影。 4.亲和标记的免疫分析 金黄色葡萄球菌的A蛋白与IgG Fc段有高度的亲和力。用酶、同位素、荧光素等标记A蛋白,替代第二抗体直接与抗体结合,可用于抗原抗体反应的分析。A蛋白对不同种动物来源的IgG 均有亲和性,可用于多数抗原抗体反应的分析,但有些动物的IgG 或少数亚类不与A蛋白结合,选择时应注意(见第三章)。生物素(biotin)是一种维生素,存在于多种生物组织中,也可以人工合成,能特异性地与来自卵蛋白的亲和素(avidin)或链霉菌的链亲合素(strepavidin)结合。生物素与亲和素有很高的亲和力,比抗原抗体结合的亲和力高

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